1樓:匿名使用者
3,5- 二硝基水楊酸比色法。
蔗糖酶酶解所生成的還原糖與 3,5- 二硝基水楊酸反應而生成橙色的3-氨基-5-硝基水楊酸。顏色深度與還原糖量相關,因而可用測定還原糖量來表示蔗糖酶的活性。
蔗糖酶米氏常數的測定本實驗操作的關鍵是什麼?
2樓:沒事逛逛雙子
關鍵點有以下三點:
(1)嚴格控制反應時間;
(2)反應溫度;
(3)ph值。
原因:是保證酶活性相同,避免由時間,溫度,ph帶來的實驗誤差.
酶活力的常用測定方法?
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常用的測定方法有取樣法和連續法。
1、取樣法
在酶反應開始後不同的時間,從反應系統中取出一定量的反應液,並用適當方法停止其反應,再根據產物和底物在化學性質上的差別進行分析,求得單位時間內酶促反應的變化量。
2、連續法
基於底物和產物在物理化學性質上的不同,在反應過程中對反應系統新增酶的變性劑以終止反應,常用的連續測定法是光吸收測定法,即根據產物和底物在某一波長或波段上有明顯的特徵吸收差別而建立起來的連續觀測方法,幾乎所有的氧化還原酶都可用此法測定。
此外如熒光法、旋光法、電化學法也是常用的連續測定方法。對不易直接測定的反應,可使用酶偶聯分析法,即用過量、專一的「偶聯工具酶」,使被測反應繼續進行到某一可直接測定的階段。近年來,酶活性的測定工作正向兩個方向發展,超微量酶活的靈敏測定,實現測定過程的自動化控制。
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酶活力的大小可以用在一定條件下,它所催化的某一化學反應的轉化速率來表示,即酶催化的轉化速率越快,酶的活力就越高;反之,速率越慢,酶的活力就越低。所以,測定酶的活力就是測定酶促轉化速率。酶轉化速率可以用單位時間內單位體積中底物的減少量或產物的增加量來表示。
酶活力的測定既可以通過定量測定酶反應的產物或底物數量隨反應時間的變化,也可以通過定量測定酶反應底物中某一性質的變化,如黏度變化來測定。通常是在酶的最適ph 值和離子強度以及指定的溫度下測定酶活力。
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酶活力的測定方法:有兩種主要方法
即終止反應法和連續反應法。
終止反應法:是在恆溫反應系統中,每隔一定時間,取出一定體積的反應液,用強酸強鹼或sds以及加熱等使反應立即停止,然後用化學法放射性化學法或酶偶聯法分析產物的形成量或底物的消耗量。這是最經典的酶活力測定方法,幾乎所有的酶都可以根據這一原理設計出具體的測定方法。
連續反應法:無須終止反應,而是在酶反應過程中用光化學儀器或電化學儀器等來監測反應的進**況,對記錄結果進行分析,然後計算出酶活力。
在測定酶活力時,為什麼對試劑配置 實際用量 血清用量 溫度 PH 作用時間均需嚴格控制 求認真解答
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