下列細胞組分進行離心分離時,需要的離心速率最高的是?細胞核

2021-03-30 15:26:27 字數 4890 閱讀 2100

1樓:匿名使用者

細胞內不同結構的比重和大小都不相同,在同一離心場內的沉降速度也不相同,根據這一原理,常用不同轉速的離心法,將細胞內各種組分分級分離出來。

分離細胞器最常用的方法是將組織製成勻漿,在均勻的懸浮介質中用差速離心法進行分離,隨著轉速增高,最先離心下來的是細胞核,然後是葉綠體,再下來是線粒體,而高爾基體應該是需要離心力最高的組分,就是最後離心下來的,因為上述組分中高爾基體比重最小。

利用超速離心機以差速離心法可從動物組織勻漿中分離出下列哪些細胞器? 細胞核,線粒體,溶酶體,核糖體

2樓:4444影子

可以,沉降速度依次為核,線粒體,溶酶體和過氧化物酶體,內質網和高爾基體,核蛋白體

3樓:楚江先知

超速離心機可以分離出線粒體,溶酶體,核糖體。分離不出細胞核,因為細胞核外圍就是一層核膜,在超速離心的時候是很容易破掉的。而其他的細胞器因為有質地堅硬的結構。

細胞組分的分級分離時分離的方法有幾種

4樓:聽雲者

試想一下,若沒有各種方法來分離組成細胞的不同區室和組分,那麼現代生物學將困難重重。從細胞訊號通路 到新陳代謝,人們一直想知道,它們在哪兒,過去、現在及將來。

賽默飛世爾科技 的市場部經理monica o』hara noonan介紹,研究人員對細胞進行分級分離(fractionate)的原因有很多。他們可能希望,當感興趣的蛋白在某些條件下或某種處理之後轉位時,對其進行追蹤。對細胞進行分級分離能增強低丰度蛋白的檢測能力,或降低下游分析或功能分析的複雜性。

如果您正在從事這一方面的研究,請繼續往下讀。從細胞 上講,我們會幫助您將小麥和穀殼分開。

細胞的組分

如何對細胞進行分級分離取決於很多因素,包括哪些儀器 、知識可以利用,您想要分離什麼,以及這些組分的下游應用是什麼。

離心是細胞分級分離中最常用的技術之一,它們單獨使用,或與其他方法結合。例如,對於高爾基體 或過氧化物酶體,大部分操作都要求高速的密度梯度離心。然而,o』hara noonan也指出,超速離心也有一些缺點,包括超速離心機是**的儀器,有些實驗室無法接觸到。

另外,密度梯度難以傾倒是出了名的,其結果是技術依賴的。

當然,其他的許多組分也可以只利用試劑和臺式儀器來富集。**商開發出一些試劑盒,能方便快捷地帶來高度富集的細胞組分。賽默飛世爾 全新設計的mem-per plus試劑盒,能在一小時之內富集完整的膜相關蛋白。

據sigma-aldrich 的產品專家michael moehlenbrock介紹,這類試劑盒的原理在很大程度上是類似的。它們往往使用低滲緩衝液給細胞膜帶來壓力,然後用等滲的提取緩衝液(帶或不帶還原劑和蛋白酶抑制劑)來維持感興趣的細胞器。有時也需要機械裂解或去汙劑裂解。

「各個不同**商在細胞分級分離試劑盒的設計上都是一致的,而不同細胞組分的差異在於緩衝液組成、裂解試劑和離心速度,」moehlenbrock說。

此類試劑盒的價值並不在於某些祕密試劑,而在於qc系統的一致性和重複性。「細胞分級分離的方法已經過充分鑑定,其操作步驟適用於大部分應用,」moehlenbrock說。「商業化試劑盒為終端使用者帶來了簡便和效率,同時提供了品質保證的安全性。

」通過改變穿插在離心步驟之間的緩衝液的去汙劑組分,研究人員可分離不止一個組分。例如,市場上許多試劑盒可收集細胞核和胞漿蛋白。其他試劑盒也帶來了三個或四個不同的組分。

cell signaling technology的cell fractionation kit產生了細胞質、細胞膜/細胞器以及細胞核/細胞骨架組分,而qiagen的qproteome cell ***partment kit分離出細胞質、細胞膜、細胞核和細胞骨架組分。

美天旎提供一種不含去汙劑的試劑盒,它利用tom22抗體標記的磁珠來特異分離線粒體。據該公司的技術支援介紹,他們不提供其他亞細胞組分的產品,但客戶可以利用自己的抗體來間接分離其他組分。

同樣地,賽默飛世爾的cell su***ce protein isolation kit標記細胞表面蛋白的外部賴氨酸,它具有一個可切割的生物素衍生物,讓此蛋白組分在細胞裂解後可**獲。

其中有什麼

在細胞組分被分離出來之後,必須驗證您的實驗,並確認這些組分確實包含了您要分離的。儘管這些試劑盒通常不包含區分各種組分的試劑,但許多會指出不同的看家基因,讓您用來確保質量。moehlenbrock表示:

「在某些情況下,我們會提供分析的建議。」例如,sigma-aldrich mitochondria isolation kit的技術指南建議檢查細胞色素c氧化酶活性和檸檬酸合酶活性,以確認外膜和內膜的完整性。

cell signaling technology也提供cell fractionation antibody sampler kit,作為分級分離試劑盒的伴隨產品。生產科學家jim cormier介紹,當您在執行western時,您會得到一個量化值,哪些組分佔多少。sampler kit包含細胞質mek1/2、線粒體凋亡誘導因子(aif)、組蛋白h3和細胞骨架波形蛋白的兔單克隆抗體,以及山羊抗兔igg。

研究人員也可利用試劑盒中的建議,或搜尋文獻,組裝自己的western blot或elisa試劑盒。不過cormier也提醒,並非每個抗體都有著它應有的特異性。

下游的分析

與超速離心相比,基於試劑盒的細胞分級分離方法快速又方便,也適合多個下游應用,如emsa、報告基因分析、酶活分析和western blot。

然而,製備過程中所使用的去汙劑和鹽可能阻礙蛋白質組學的應用,如質譜,「這有時取決於去汙劑的量,去除的容易程度,以及是否用於功能分析,」o』hara noonan說。「在某些情況下,您可能需要透析或脫鹽。」

同樣地,有時可能需要額外的步驟,來增加產物的純度。在讀研究生時,moehlenbrock一般使用臺式離心機來製備線粒體。「有時我會用11,000 x g來去除細胞碎片。

之後獲得線粒體提取物,並用蔗糖梯度和超速離心機來進一步純化。這取決於您想做什麼,

關於離心細胞器的問題

5樓:

根據不同細胞器的密度不同。

細胞離心技術

離心是研究如細胞核、線粒體、高爾基體、溶酶體和微體,以及各種大分子基本手段。一般認為,轉速為10~25kr/min的離心機稱為高速離心機;轉速超過25kr/min,離心力大於89kg者稱為超速離心機。目前超速離心機的最高轉速可達100kr/min,離心力超過500kg。

(一)、差速離心(differential centrifugation)

在密度均一的介質中由低速到高速逐級離心,用於分離不同大小的細胞和細胞器。

在差速離心中細胞器沉降的順序依次為:核、線粒體、溶酶體與過氧化物酶體、內質網與高基體、最後為核蛋白體。

由於各種細胞器在大小和密度上相互重疊,而且某些慢沉降顆粒常常被快沉降顆粒裹到沉澱塊中,一般重複2~3次效果會好一些。

差速離心只用於分離大小懸殊的細胞,更多用於分離細胞器。通過差速離心可將細胞器初步分離,常需進一步通過密度梯離心再行分離純化。

速度逐漸提高,樣品按大小先後沉澱

(二)、密度梯度離心(density gradient centrifugation)

用一定的介質在離心管內形成一連續或不連續的密度梯度,將細胞混懸液或勻漿置於介質的頂部,通過重力或離心力場的作用使細胞分層、分離。這類分離又可分為速度沉降和等密度沉降平衡兩種。密度梯度離心常用的介質為氯化銫,蔗糖和多聚蔗糖。

分離活細胞的介質要求:1)能產生密度梯度,且密度高時,粘度不高;2)ph中性或易調為中性;3)濃度大時滲透壓不大;4)對細胞無毒。

a等速度沉降,b等密度沉降

1、速度沉降

速度沉降(velocity sedimentation)主要用於分離密度相近而大小不等的細胞或細胞器。這種降方法所採用的介質密度較低,介質的最大密度應小於被分離生物顆粒的最小密度。

生物顆粒(細胞或細器)在十分平緩的密度梯度介質中按各自的沉降係數以不同的速度沉降而達到分離。

2、等密度沉降

等密度沉降(isopy**ic sedimentation)適用於分離密度不等的顆粒。

細胞或細胞器在連續梯度的介質中經足夠大離心力和是夠長時間則沉降或漂浮到與自身密度相等的介質處,並停留在那裡達到平衡,從而將不同密度的細胞或細胞器分離。

等密度沉降通常在較高密度的介質中進行。介質的最高密度應大於被分離組分的最大密度,而且介質的梯度要求較高的陡度,不能太平緩。再者,這種方法所需要的力場通常比速率沉降法大10~100倍,故往往需要高速或超速離心,離心時間也較長。

大的離心力、長的離心時間都對細胞不利。大細胞比小細胞更易受高離心力的損傷,而且停留在等密度介質中的細胞比處在移動中的細胞受到更大的損傷。因此,這種方法適於分離細胞器,而不太適於分離和純化細胞。

如圖是從不同生物組織中分離出來的細胞結構示意圖,請據圖回答下列問題:(1)為研究細胞內各種細胞器的

細胞器分離原理

6樓:海的生活叫逍遙

細胞器的分離,一般採用差速離心法,此法是利用細胞各組分質量大小不同,在離心管不同區域沉降的原理,分離出所需組分,分離得到的細胞器,其純度可採用電子顯微鏡法、免疫學法或測定標誌酶活力法進行鑑定.

細胞器(***anelle)一般認為是散佈在細胞質內具有一定形態和功能的微結構或微器官。但對於「細胞器」這一名詞的範圍,還存在著某些不同意見。 細胞中的細胞器主要有:

線粒體、內質網、中心體、葉綠體,高爾基體、核糖體等。它們組成了細胞的基本結構,使細胞能正常的工作,運轉。

7樓:匿名使用者

組織經過勻漿化後,放在均勻的懸浮介質上,即可用差 速離心法分離其亞細胞組分。

生物必修1樣卷

8樓:coco上官濤

期中考試的時候就會發你了

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