1樓：
因為我們挑的是菌落，而一般我們認為一個菌落就是又一個細菌繁殖產生的。所以菌落內的細菌都是同一基因型（也就是說要不然都帶有質粒，要不然都沒有或者是其他質粒），也就是說要挑單克隆。
如果挑的不是單克隆，那麼菌落內的細菌的種類就會不同，有的有質粒，有的沒有，有的帶其他質粒。這樣的話，我們做後續的實驗就不好做了。
psicheck-2質粒轉染細胞後，用什麼藥物篩選穩定克隆
2樓：匿名使用者
基因敲出質粒轉染可以構建穩定細胞株
一種是脂質體轉染後,單克隆篩選穩定細胞株.另外一種是應用逆轉錄病毒,慢病毒轉染,篩選穩定細胞株.
脂質體轉染：在轉染24小時後,消化細胞並計數.將細胞種到96孔板,保證每個孔2-3個細胞,這樣才能得到單克隆.
待細胞貼壁後,加入抗生素篩選.篩選時間和濃度視細胞而定.一般g418一個星期作用,嘌呤黴素2-3天.
脂質體法篩單克隆時間較長,且效率低,大概只有1%.
病毒轉染：先要用包裝細胞,一般為293細胞,包裝出病毒,再用病毒轉染目的細胞.包裝病毒視不同型別的病毒而定,一般要3-5天的時間.
包裝好的病毒要測滴度,根據滴度決定轉染目的細胞的病毒量.轉染目的細胞1-2天后加抗生素篩選得到穩定細胞株.
病毒轉染得到穩定細胞株的效率高,只是步驟繁瑣.
質粒轉染和病毒轉染有什麼本質上的區別
3樓：阿樓愛吃肉
兩者在本質上並沒有區別。
無論是質粒轉染，還是病
毒轉染，均是真核細胞主動或被動匯入外源dn**段而獲得新的表型的過程。隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷髮展，轉染已經成為研究和控制真核細胞基因功能的常規工具。在研究基因功能、調控基因表達、突變分析和蛋白質生產等生物學試驗中，其應用越來越廣泛。
隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉染目前已成為實驗室工作中經常涉及的基本方法。轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因槍屬於通過物理方法將基因匯入細胞的範例；
化學介導方法很多，如經典的磷酸鈣共沉澱法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術；生物介導方法，有較為原始的原生質體轉染，和現在比較多見的各種病毒介導的轉染技術。
4樓：匿名使用者
一、質粒轉染：相對簡單的基因傳遞方式，與三種病毒載體主動進行細胞攻擊侵染方式不
同，質粒轉染屬於被動擴散。
質粒轉染的優點：質粒載體的構建流程相對簡單，速度快（病毒載體都需要先構建載體後包裝成病毒顆粒）。
質粒轉染的缺點也十分明顯：
1）在細胞水平，質粒轉染效率不穩定，不同細胞依照不同的轉染方法和轉染介質，效率差
別較大，且大部分方法效率不高；
2）質粒轉染一般入核效率低，特別是陽離子脂質體，陽離子聚合物等介質，電轉質粒入核
的效率則比介質轉高不少，但比起慢病毒轉染，效率仍然低很多，且對細胞損傷較大。
二、病毒載體轉染：病毒載體相對於質粒，優勢十分明顯
病毒載體的優點：轉染效率高，應用不同的病毒載體工具可實現細胞和動物的高效轉導
和穩定轉導。
病毒載體的缺點：不同的病毒載體的包裝需要比較複雜流程和工藝優化，相對技術門檻
較高。我們實驗室的經費比較有限，我們用rfect-dna轉染293細胞
5樓：
先說下相同點。
質粒轉染和病毒轉染本質上都
是把外源基因匯入細胞或活體，起到的作用是把外源基因放入細胞，是相同的。
區別，簡單的可以從英文角度說一下，質粒轉染中的轉染這個詞是transfection，病毒轉染中的轉染可以是transduction。可以理解為把質粒（目的基因）transfection 到病毒的域，病毒接收到目的基因，使用病毒又把我們的質粒（目的基因）transduction 進細胞。
如果你是學生問這個問題可能問的是兩者用起來有什麼區別。
質粒轉染需要用轉染試劑或者工具進行質粒的匯入。
病毒轉染中病毒粒子是病毒殼（介導細胞轉導/引入整合酶/介導體內靶向轉導）+目的基因的複合物，不用或者用簡單的試劑就能完成基因匯入。
詳細的就不說了，內容太多，這個問題太廣。
6樓：匿名使用者
平時都是用無菌的質粒dna轉染，質粒轉染不一定需要慢病毒包裝，lipo3000是屬於質粒dna和sirna都能轉染的，我們實驗室用專門轉染質粒dna的deofecteu。
含有要轉染細胞的質粒的大腸桿菌搖培到什麼程度最好?吸光值大概是多少？肉眼觀察的話是什麼狀態？ 5
7樓：匿名使用者
16-20個小時吧，我一般都是，肉眼看就是非常渾濁了，但是od沒測過，記得要搖床培養。
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