1樓：
1. 將質粒轉入dh5α的感受態態細菌中，塗布於含有氨苄抗性的固體培養板上，過夜培養。2.
挑選單克隆，轉接3-5ml含氨苄抗性的液體培養基，37度振盪培養10-12h。3. 提取質粒（步驟省略），並將質粒進行進行瓊脂糖凝膠電泳，一般可以觀察到2-3條帶，選擇其中最下面一條帶（超螺旋形式）大小約為2000左右的克隆。
4. 以上述挑選的克隆質粒為模版，以m13為引物，進行pcr檢測（步驟省略，退火溫度為55度），注意設定陰性和陽性對照。5.
pcr產物，進行瓊脂糖凝膠電泳，注意選擇合適的dna分子量marker，比如dl2000。6. 擴充套件產物為750bp左右條帶的即為正確的克隆。
在構建基因表達載體時候，怎麼利用選擇培養基鑑別是質
質粒加入宿主細胞進行轉化，為什麼在塗布含有a
2樓：匿名使用者
一般認為,感受態細胞製備過程和質粒轉化過程會使宿主細胞活力受損,所以在轉化完後,會在lb培養基中活化一小時,使細胞恢復活力.
連線克隆載體,提取質粒後目的基因仍然在,怎麼回事
3樓：
提取質粒後目的基因仍然在是什麼意思？
是說應該被替換了嗎？
如果是沒有連線成功考慮
載體酶切是否完全；
載體與目的片段的比例是否合適，推薦載體：目的片段=1：3感受態細菌的效率如何，保證感受態效率達到10^8以上對於連線轉化非常重要。
4樓：匿名使用者
目的基因仍然在，是什麼意思？仍然在克隆載體上？不在就不正常了好不好
在構建基因表達載體時候，怎麼利用選擇培養基鑑別是質粒 質粒
先利用選擇培養基篩選有抗性標籤質粒的，挑選做pcr驗證和酶切驗證目的片段 根據所學內容回答下列問題 1 在構建基因表達載體時，可用一種或者多種限制酶進行切割 為了避免目的 1 在構建基因表達載體時，可用一種或者多種限制酶進行切割 為了避免目的基因和載體在酶切後產生的末端發生任意連線，一般選用兩種限制...
跪求用來判斷選擇培養基是否起到了選擇作用需要設定的對
牛肉膏抄 蛋白腖的培養基襲屬於完全培養基，絕大部分菌菌都可在其生長，無選擇性。選擇培養基具有選擇性，特定的微生物才可生長。做選擇性實驗時，目標菌會混在很多種菌當中，如果混合菌在牛肉膏蛋白腖的培養基和選擇培養基生長情況沒任何差距，意味著該選擇培養基對目標菌無選擇作用，當無牛肉膏蛋白腖的培養基作對照時，...
利用加壓蒸汽對培養基進行滅菌時，常易招致哪些不利影響？如何防止
有些成份容易高溫分解，需要過濾滅菌後再新增到部分降溫的培養基裡，如各種抗生素和維生素等。還有些成份之間在高溫下會發生化學反應，破壞其活性。如葡萄糖與氮源物質發生反應，使培養基營養下降，顏色加深。應該單獨滅菌後再混合在一起。滅菌可能某些不耐熱的物質受到破壞，如使糖類形成氨基糖 焦糖。還可能使磷酸鹽 碳...