1樓：南京金益柏生物科技****
就是多重pcr,第一次獲得產物濃度不夠,但迴圈數過多會造成產物質量不好,就會以第一次pcr產物為模板,設計內引物進行第二次擴增,獲得高質量產物
2樓：
巢式pcr是一種變異的聚合酶鏈反應(pcr)，使用兩對（而非一對）pcr引物擴增完整的片段。第一對pcr引物擴增片段和普通pcr相似。第二對引物稱為巢式引物（因為他們在第一次pcr擴增片段的內部）結合在第一次pcr產物內部，使得第二次pcr擴增片段短於第一次擴增。
巢式pcr的好處在於，如果第一次擴增產生了錯誤片斷，則第二次能在錯誤片段上進行引物配對並擴增的概率極低。因此，巢式pcr的擴增非常特異。
3樓：匿名使用者
形象點兒說就像鳥巢，兩對兒引物，一對擴長片段，一對兒設計在長片段內，這樣做的好處是，提高擴增效率和特異性
4樓：百替生物
巢式pcr（nest pcr），使用兩對引物對目的基因進行擴增的一種pcr技術。首先在該基因起始密碼子上游數百bp和終止密碼子下游數百bp位置設定一對引物，這對引物由於可操控性大，可以將tm值，引物結構等設定到最佳。或者可以通過軟體自動分析，由機器給出引物序列。
然後再在目的基因的準確位置設計第二對引物。
在進行pcr時，先用第一對引物進行擴增，擴增後跑膠檢測，如果此時跑膠已經可以檢測出較好的條帶，可以進行**純化，再將**產物作為模板，用第二對引物進行第二輪擴增。如果第一輪產物跑膠時看不清楚條帶，則可以將產物適當稀釋，以此作為第二輪的模板進行擴增，一般在第一輪以低拷貝量存在的dna通過第二輪的擴增都可以成功獲得的。祝你成功。
想要獲得基因克隆，真核或者原核表達載體的話，我們百替生物也可以提供此類服務！公司
（生物）詳細解釋下什麼是巢式pcr
巢式pcr是什麼意思？
5樓：
巢式pcr（nested pcr），是指利用兩套pcr引物（巢式引物）對進行兩輪pcr擴增反應。
在第一輪擴增中，外引物用以產生擴增產物，此產物在在內引物的存在下進行第二輪擴增。
由於巢式pcr反應有兩次pcr擴增，從而降低了擴增多個靶位點的可能性（因為與兩套引物都互補的引物很少）增加了檢測的敏感性；又有兩對pcr引物與檢測模板的配對，增加了檢測的可靠性。
一般應用於動物方面。如：病毒，梅毒螺旋體，hiv，腫瘤基因等
標準protocol在此
此外，還引生出半巢式pcr，多重巢式pcr等等
6樓：香彥滑英華
巢式pcr是一種變異的聚合酶鏈反應(pcr)，使用兩對（而非一對）pcr引物擴增完整的片段。第一對pcr引物擴增片段和普通pcr相似。第二對引物稱為巢式引物（因為他們在第一次pcr擴增片段的內部）結合在第一次pcr產物內部，使得第二次pcr擴增片段短於第一次擴增。
巢式pcr的好處在於，如果第一次擴增產生了錯誤片斷，則第二次能在錯誤片段上進行引物配對並擴增的概率極低。因此，巢式pcr的擴增非常特異。
7樓：陸河路海寧
半巢式pcr
就是巢式的一種特殊型別，巢式pcr是在完成普通pcr前提下，繼續擴增比普通pcr小的片斷，可以增加特異性，而半巢式pcr是隻換其中的一個引物，擴增比普通pcr小的片斷。通俗的說，pcr是尺子上1-4釐米，那麼巢式就是2-3釐米，半巢式就是1-3或2-4釐米，就這樣子。
8樓：敬揚圭景天
就是多重pcr,第一次獲得產物濃度不夠,但迴圈數過多會造成產物質量不好,就會以第一次pcr產物為模板,設計內引物進行第二次擴增,獲得高質量產物
9樓：庫梧永晶輝
巢式pcr（nest
pcr），使用兩對引物對目的基因進行擴增的一種pcr技術。首先在該基因起始密碼子上游數百bp和終止密碼子下游數百bp位置設定一對引物，這對引物由於可操控性大，可以將tm值，引物結構等設定到最佳。或者可以通過軟體自動分析，由機器給出引物序列。
然後再在目的基因的準確位置設計第二對引物。
在進行pcr時，先用第一對引物進行擴增，擴增後跑膠檢測，如果此時跑膠已經可以檢測出較好的條帶，可以進行**純化，再將**產物作為模板，用第二對引物進行第二輪擴增。如果第一輪產物跑膠時看不清楚條帶，則可以將產物適當稀釋，以此作為第二輪的模板進行擴增，一般在第一輪以低拷貝量存在的dna通過第二輪的擴增都可以成功獲得的。祝你成功。
想要獲得基因克隆，真核或者原核表達載體的話，我們百替生物也可以提供此類服務！公司
巢式pcr的原理
10樓：匿名使用者
dna的半保留複製是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈dna在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在dna聚合酶與啟動子的參與下，根據鹼基互補配對原則複製成同樣的兩分子挎貝。在實驗中發現，dna在高溫時也可以發生變性解鏈，當溫度降低後又可以復性成為雙鏈。
因此，通過溫度變化控制dna的變性和復性，並設計引物做啟動子，加入dna聚合酶、dntp就可以完成特定基因的體外複製。
但是，dna聚合酶在高溫時會失活，因此，每次迴圈都得加入新的dna聚合酶，不僅操作煩瑣，而且**昂貴，制約了pcr技術的應用和發展。
發現耐熱dna聚合同酶--taq酶對於pcr的應用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個迴圈加酶，使pcr技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，pcr技術得以大量應用，並逐步應用於臨床。
pcr技術的基本原理 類似於dna的天然複製過程，其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。pcr由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成：①模板dna的變性：
模板dna經加熱至93℃左右一定時間後，使模板dna雙鏈或經pcr擴增形成的雙鏈dna解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；②模板dna與引物的退火(復性)：模板dna經加熱變性成單鏈後，溫度降至55℃左右，引物與模板dna單鏈的互補序列配對結合；③引物的延伸：dna模板--引物結合物在taqdna聚合酶的作用下，以dntp為反應原料，靶序列為模板，按鹼基配對與半保留複製原理，合成一條新的與模板dna 鏈互補的半保留複製鏈重複迴圈變性--退火--延伸三過程，就可獲得更多的「半保留複製鏈」，而且這種新鏈又可成為下次迴圈的模板。
每完成一個迴圈需2～4分鐘， 2～3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。
11樓：匿名使用者
巢式pcr（nested pcr），是指利用兩套pcr引物（巢式引物）對進行兩輪pcr擴增反應。
在第一輪擴增中，外引物用以產生擴增產物，此產物在在內引物的存在下進行第二輪擴增。
由於巢式pcr反應有兩次pcr擴增，從而降低了擴增多個靶位點的可能性（因為與兩套引物都互補的引物很少）增加了檢測的敏感性；又有兩對pcr引物與檢測模板的配對，增加了檢測的可靠性。
一般應用於動物方面。如：病毒，梅毒螺旋體，hiv，腫瘤基因等
巢式pcr，可以在10的六次方基因組背景下檢測到一個拷貝的病毒基因，也不像二次pcr容易產生成片的產物，是效果最好的pcr，但也因此是最容易汙染的pcr
巢式pcr的介紹
12樓：此生可帶
巢式pcr是一種變異的聚合酶鏈反應(pcr)，使用兩對（而非一對）pcr引物擴增完整的片段。第一對pcr引物擴增片段和普通pcr相似。第二對引物稱為巢式引物（因為他們在第一次pcr擴增片段的內部）結合在第一次pcr產物內部，使得第二次pcr擴增片段短於第一次擴增。
巢式pcr的好處在於，如果第一次擴增產生了錯誤片斷，則第二次能在錯誤片段上進行引物配對並擴增的概率極低。因此，巢式pcr的擴增非常特異。
巢式pcr相對普通pcr的優缺點有哪些
13樓：匿名使用者
其優點是：
1、克服了單次擴增平臺期效應的限制，使擴增倍數提高，從而極大的提高了pcr的敏感性；
2、由於模板和引物的改變，降低了非特異性反應連續放大進行的可能性，保證了反應的特異性；
3、內側引物擴增的模板是外側引物擴增的產物，第二階段反應能否進行，也是對第一階段反應正確性的鑑定，因引可以保證整個反應的準確性及可行性。
但其亦有缺點：
進行第二次pcr墳增引起交叉汙染的機率大。為了克服此缺點，可彩用同一反應管中巢式pcr，主要利用內外引物tm值不同。
如果你已排除引物，酶，rna提取，逆轉錄等等其他原因引起的pcr不成功，確定關鍵原因是模板量低的話，可以用巢式。
什麼叫顯式 什麼叫隱式，什麼是顯式解，什麼是隱式解
顯式演算法基於動力學方程，分為靜態顯式演算法和動態顯式演算法。顯式演算法最大優點是有較好的穩定性。動態顯式演算法採用動力學方程的一些差分格式 如廣泛使用的中心差分法 線性加速度法 newmark法和wilson法等 不用直接求解切線剛度，不需要進行平衡迭代。隱式演算法中，在每一增量步內都需要對靜態平...
開放式廚房缺點是什麼，開放式廚房 優缺點是什麼？
開放式廚房的缺點主要是以下兩點 1 油煙問題 中式烹飪油煙較大，所以要選用力道強勁的抽油煙機 2 整體的整潔度 開放式廚房，通常客廳餐廳廚房全部都是一覽無餘，所以任何一處的不整潔都會非常明顯。建議多裝櫥櫃便於收納，另外平時每餐完成後養成整理並擦乾淨的習慣。另外建議你看一下帖子，參考一下 美家美戶從3...
什麼是三次二項式，什麼叫三次二項式
三次二項式就是說這個多項式的最高次數是三次，並且由兩個單項式組成。次 表示相乘的,項 表示相加的。多項式中，每個單項式叫做多項式的一個項 每一個項的次數中最高的一個，就叫作這個多項式的次數。一個多項式是幾次幾項，就叫幾次幾項式。在計算時，要注意，相同次數的除係數外都一樣的式子相加，係數相加，次數不變...