1樓：匿名使用者
比較4個不同的cdna序列，只有3號和4號外顯子有區別。所以在這2個外顯子部位設計了針對可以區分這4個不同序列的引物
1，提取總rna
2，rt-pcr
3號外顯子引物，tm 大概52度
正向引物 5' gattggacaggctggact 3'
反向引物 5' agaagtggtggcagtgatt 3'
**結果: nurr1-a,b,c產物大小288bp;nurr1-d無產物.
7號外顯子引物: tm: 58-59°c
sense primer: 5' ccaaagccgaccaagacc 3'
anti-sense primer: 5' attattgctggcggtggc 3'
**結果: nurr1-a,d 472bp長的產物; nurr1-b有418bp產物; nurr1-c有351bp產物.
3. 結果分析s:
nurr1-a nurr1-b nurr1-c nurr1-d
擴增3號外顯子 288bp 288bp 288bp 無產物
a擴增7號外顯子 472bp 418bp 351bp 472bp
4. 疑問: refseq for nurr1-b,c,d 因為不足夠的支援而被永久抑制
2樓：哈哈乖乖
一序列的比較,只有4個變數之間的差異,從而設計exon3和exon7具體底漆可以區分這兩個子4變異。
總rna提取準備
2。通過。
exon3底漆:提戈亞-蒙泰羅:約52攝氏度
意義:5 ' gattggacaggctggact底漆3 '
anti-sense底漆:5 ' agaagtggtggcagtgatt 3 '
**結果:288bp產品在nurr1-a、乙、丙、沒有放大產品在nurr1-d。
exon7底漆:提戈亞-蒙泰羅:58-59°c
意義:5 ' ccaaagccgaccaagacc底漆3 '
anti-sense底漆:5 ' attattgctggcggtggc 3 '
**結果:472bp nurr1-a產品,產品在nurr1-b;418bp;351bp nurr1-c產品。
結果分析:來講
nurr1-a nurr1-b nurr1-c nurr1-d
我們amplication 288bp 288bp 3 288bp的產品
我們amplication 418bp 351bp為7 472bp 472bp
4。問題:refseq為nurr1-b、c、d已經永久地抑制,因為缺乏支援。
3樓：陰陽五行律師
比較了四個變體的cdna序列，它們只在外顯子3和外顯子7之間存在區別，因此可以通過設計針對這兩個外顯子的特殊引物來區別這四個變體。
1.總rna提取
2.逆轉錄pcr
外顯子3引物：熔解溫度：約52℃
正向引物 5' gattggacaggctggact 3'
反向引物 5' agaagtggtggcagtgatt 3'
**結果: nurr1-a,b,c產物大小288bp;nurr1-d無產物
7號外顯子引物: tm: 58-59°c
sense primer: 5' ccaaagccgaccaagacc 3'
anti-sense primer: 5' attattgctggcggtggc 3'
**結果: nurr1-a,d 472bp長的產物; nurr1-b有418bp產物; nurr1-c有351bp產物.
3. 結果分析:
nurr1-a nurr1-b nurr1-c nurr1-d
擴增3號外顯子 288bp 288bp 288bp 無產物
a擴增7號外顯子 472bp 418bp 351bp 472bp
4. 問題: nurr1-b,c,d的refseq記錄因為支援不足而被長期廢止
4樓：張豔牛蒡
將四組突變cdna序列進行比較，發現僅僅在第3個外顯子和第7個外顯子出有區別，因此針對這兩個外顯子設計引物就能夠區分這四個突變體。
1、 rna的提取
2、 實時定量pcr
第3個外顯子的引物：解鏈溫度為52°c
正向引物序列：5' gattggacaggctggact 3'
反向引物序列：5' agaagtggtggcagtgatt 3'
預期結果：nurr1-a,b,c產物大小288bp;nurr1-d無產物
第7個外顯子的引物：解鏈溫度為58-59°c
正向引物序列：5' ccaaagccgaccaagacc 3'
反向引物序列：5' attattgctggcggtggc 3'
**結果: nurr1-a,d 472bp長的產物; nurr1-b有418bp產物; nurr1-c有351bp產物.
3、結果分析
nurr1-a nurr1-b nurr1-c nurr1-d
擴增3號外顯子 288bp 288bp 288bp 無產物
擴增7號外顯子 472bp 418bp 351bp 472bp
4、nurr1-b,c,d在refseq資料庫中被永久消除，原因是沒有充分的理論支援。
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