1樓：匿名使用者
marker看你買的是什麼樣的，有的還是粉末狀呢，那個用水溶解後也需要加loading buffer沸水浴處理的。不過現在賣的很多都是那種直接點樣的。說明書一般都有說的，一般10微升。
loading buffer就是上樣緩衝液的英文。
另外，你的實驗步驟裡面，你打錯了，第三步是10000rpm*2min,我非常肯定這個步驟一定是高速離心。
第一個步驟，我們一般取1ml菌液離心10000rpm*5min吧，具體記得不太清楚了。然後加loading buffer好像是120微升，1倍的，100微升也ok啦，然後沸水浴5到10分鐘，然後高速離心，點樣。為了避免串樣，維持各點樣孔之間的那種壓力吧，具體怎麼說我記不清楚了，反正就是防止別的孔的樣品跑到空白泳道，很難看的。
所以在空白處也點上1倍的loading buffer
你按照一個固定的數字做下來，點樣的時候開始要摸索一下，多點幾個樣，看看點多少微升合適，因為你的菌液濃度什麼的我們也不知道。你要有條件，可以給蛋白定量，因為跑電泳蛋白濃度過高會很難看，濃度低了看不清楚。
離心菌液時可不可以用純水加入到菌液中配平
2樓：匿名使用者
一般是可以的。
如果你離心完的菌液直接是用來做實驗（純化蛋白之類），那時沒問題的。加純水或加緩衝buffer都可以。
如果你離心完的菌是要後續培養之類的還是需要注意加入的水得是無菌的，否則有可能感染。不過一般沒啥問題，我離心配平也經常用純水。
望採納，如有疑問，歡迎追問。
sds蛋白電泳完如何去除sds
3樓：長春北方化工灌裝裝置股份****
可以先用triton除去sds,然後在用tris來除去triton，我以前在園子裡看到有人這樣建議過。
sds page 跑蛋白的菌液處理？（具體見說明，請勿複製）
4樓：匿名使用者
loading buffer加多少都是自己定的 看你的菌體有多少 一般你要是3 4 ml菌液離心後的菌體加30-50ul就行。
你光說板的厚度了 沒說梳子大小啊 一般上15-30ul吧 看你梳子了 不要上太多 梳子小的話10ul也可以。
看到最後我明白了 你的梳子是那種只有兩個孔的那種，一個小的一個大的，那你上揚上多少要看你的梳子能裝多少了 你問的太抽象了。
破菌時加了點sds，蛋白還需要冰上放置嗎？
5樓：匿名使用者
不必放在冰上，在你操作這麼短的時間是沒問題的，尤其是菌體裡的蛋白，相對都很穩定的，不太容易降解。
iptg誘導完的大腸桿菌想做western blot 該如何處理菌體？
6樓：網友
最簡單的辦法： 取200ul菌，離心去上清，在菌體里加入50ul 2%sds，再加入16ul 4x loading buffer，煮上五分鐘即可以上樣。 用超聲的辦法太麻煩了，特別是菌體比較少的情況。
7樓：匿名使用者
溶菌酶終濃度1mg/ml即可，可用水或pbs配成10mg/ml或20mg/ml儲存液，裂解後超聲破碎菌體。
破菌時加了點sds，蛋白還需要冰上放置嗎
8樓：北京索萊寶科技****
不必放在冰上，在你操作這麼短的時間是沒問題的，尤。
其是菌體裡的蛋白，相對都很穩定的，不太容易降解。
在做菌體的sds電泳時，菌體條帶會橫向的變寬，求解！**出了錯！
9樓：匿名使用者
是做protein expression test麼？什麼叫菌體條帶橫向變寬？是說每個lane都很寬，影響到旁邊的lane了？
降低上樣量了麼，還有你的sds gel可能配的比例不太好，你的條帶清晰麼，有彌散拖尾的現象麼？
10樓：匿名使用者
膠配的質量不好，或者凝固不好。
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