1樓：匿名使用者
中心法則：dna轉錄成為rna，rna翻譯成為蛋白質，蛋白質稱為各個功能的表達者，但是dna轉錄出來的rna並不一定全部翻譯成為蛋白質，dna轉錄成為rna後經過剪下修飾才能進一步翻譯成為蛋白質，所以想要看某一個基因的表達量，用dna做為模版是不準確，用rna的話才能確定基因的表達量。
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植物rna為何不易提取 提rna總是提不出來，為什麼？
2樓：前炭繳泛指叵
可以選擇rna表達高峰時期的植物組織來提取，比如幼苗。還有就是注意rna酶的降解。
3樓：酸棗樹
買個好的試劑盒，華越洋生物的植物rna提取試劑盒，用了你就知道了。
4樓：
因為rna容易降解，可用大公司的試劑盒。
檢測基因表達的方法
5樓：小小芝麻大大夢
主要用探針檢測mrna或用抗體檢測出表達的蛋白質(轉錄水平上對特異mrna的檢測和翻譯水平上對特異蛋白質的檢測)
一、外源基因轉錄水平的鑑定。
基因表達分為轉錄及翻譯兩階段，轉錄是以dna（基因）為模板生成mrna的過程，翻譯是以mrna為模板生成蛋白質的過程，檢測外源基因的表達就是檢測特異mrna及特異蛋白質的生成。所以基因表達檢測分為兩個水平。
即轉錄水平上對特異mrna的檢測和翻譯水平上對特異蛋白質的檢測。轉錄水平上的檢測主要方法是northern雜交，它是以dna或rna為探針，檢測rna鏈。和southern雜交相同，northern雜交包括斑點雜交和印跡雜交。
也可用rt-pcr（reverse transcribed pcr）方法檢測外源dna在植物體內的轉錄表達。其原理是以植物總rna或mrna為模板進行反轉錄，然後再經pcr擴增。
如果從細胞總rna提取物中得到特異的cdna擴增條帶，則表明外源基因實現了轉錄。此法簡單、快速，但對外源基因轉錄的最後決定，還需與northern雜交的實驗結果結合。
二、外源基因表達蛋白的檢測。
表達蛋白的檢測方法有三種：
1、生化反應檢測法：主要通過酶反應來檢測；
2、免疫學檢測法：通過目的蛋白（抗原）與其抗體的特異性結合進行檢測，具體方法有western雜交、酶聯免疫吸附法（elisa）及免疫沉澱法；
3、生物學活性的檢測。
western雜交是將聚丙烯醯胺凝膠（sds-page）電泳分離抗原（antigen）固定在固體支援物上（如硝酸纖維素膜，nc膜）。不同分子量大小的蛋白質在凝膠中遷移率不同，據此可確定特定的抗原存在與否以及相對丰度，或者蛋白質是否遭到降解等。
蛋白質電泳後轉到nc膜，放在蛋白質（如牛血清蛋白bsa）或奶粉溶液中，溫育，以封閉非特異性位點，然後用含有放射性標記或酶標記的特定抗體雜交，抗原-抗體結合，再通過放射性自顯影或顯色觀察。
6樓：匿名使用者
補充：逆轉錄pcr和實時pcr的縮寫都是rt-pcr
實時pcr沒做過，不知道有什麼用。
逆轉錄pcr就是擴增目專的rna的意思。就屬是使少量的目的rna擴增成大量的dna。如果能擴增成功，則說明樣品中含有目的rna。這一步只能說明目的基因被轉錄了。
northern blot也是用來檢測rna的，可以大致地檢測出含有目的序列的rna有多少種。大致地。
western blot是用來檢測蛋白質的。先製作針對目的蛋白質的抗體，然後用這個抗體檢測目的蛋白質。如果樣品含有目的蛋白，那麼抗體會和這個蛋白結合，並能相對容易地被檢測出來。
所謂直接檢測，是指如果那個基因能產生一些很明顯的東西（譬如產生特殊的酶、發光、使葉子變成金色、多長一隻眼睛。那麼就根據這些來直接檢測那個基因有無表達。
詳情請看wiki
請教jcn168：
regular pcr 是如何 monitor the transcription 的？
7樓：匿名使用者
檢測基因表抄達的方法：
轉錄水襲。平檢測：rt-pcr，real-time pcr，northern blot
翻譯水平檢測：western blot
還有直接檢測，如報告基因、融合熒光蛋白等。
———我是一樓）——rt-pcr是反轉錄pcr，是半定量方式。real-time pcr可以精確定量。 二者不同。
後者為了區別於rt-pcr，一般不縮寫。
8樓：你and你
先提取rna，然後把rna反轉錄成cdna，再對cdna進行qpcr擴增，就能測目的基因的表達量。
ìáè¡dnaê±rna㸵äê¹óã
植物中總dna的提取ctab法 如何去除dna樣品中的rna
9樓：匿名使用者
因為ctab法提取的dna總會或多或少地有rna殘留，並不影響一般的pcr實驗。如果有特殊實驗需要去除rna，常用的方法是加rna酶進行消化。
trizol法提取rna如何避免dna汙染
10樓：國際不配叫米蘭
專兩層，取rna層的時候吸取一定要屬小心，吸得時候一定要緩慢，不要怕浪費，有的人吸得很多，很怕浪費，結果就吸到了中間層和下層，個人覺得吸取80%最多了，再多就很容易吸到雜質了，操作要小心，動作快速準卻，這樣才能提到高質量的rna
11樓：9武
1,裂解組織或者細胞使用的。
trizol量偏少；
2，使用的組織材料中含有大量的有機回溶劑（如：乙醇/異丙醇答等）、高純度的buffer、鹼性溶劑等；
3，如果提取的rna中含有dna時，也可以使用dnase i進行dna消化。
12樓：匿名使用者
除了上樓的方法—復—一般操作都需制要那樣進行的。
還有bai，如果你對rna質量du要求很高的話，可以用zhidna酶去除daodna汙染。不過有可能導致rna的部分降解。或者也可以純化rna，這些步驟都可以避免dna汙染。
不過dna酶慎用！
13樓：比哦三代眼
我也是bai類似問題，rna用dutaq酶擴出片段。。。悶zhi可以在rt前用dnase1處理~
方法dao：rna(1ug）回+buffer（1ul）+water（to9ul)+dnase（1ul） 37度。
答30分。+ 25mm edta 60度 10分鐘。
然後不換管直接在裡面加rt的東西 最後定容到20ul 上pcr
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