請問高手,免疫共沉澱中protein A瓊脂糖珠的作用原理?謝謝

2021-03-21 23:19:54 字數 3162 閱讀 5885

1樓:笑起來露16顆牙

prorein a或者 protein g能特異性地結合到免疫球蛋白的fc片段,所以能和抗體結合,抗體和你的目標蛋白結合,目標蛋白和相互作用的蛋白結合。

2樓:匿名使用者

protein a 可以特異性的和igg結合。

免疫共沉澱中proteina/g的工作原理?western blot中封閉原理

3樓:匿名使用者

不知道你所說的proteina / protein g 是偶聯了beads的嗎?

如果是:用來結合抗體的。

如果不是:一般用來在加入抗體之前的封閉,當然也可以用來結合抗體的。

4樓:匿名使用者

我說下個人理解,我認為加入proteina/g是一方面與抗體結合,另一部位與瓊脂糖珠子結合,便於後續分離,至於問題2我就不清楚了

免疫共沉澱中igg有什麼用 詳細解釋 謝謝

5樓:小學生

是抗體,用來與你感興趣的蛋白結合,同時可以與包被有proteina/g結合,形成一個複合物。在離心或磁場的作用下,包被有proteina/g的小珠(如凝膠珠或磁珠)被分離出來,連帶著你感興趣蛋白被分離出來,如果你感興趣的蛋白與其它蛋白有穩定的結合的話,也將被分離,通過鑑定這些連帶被分離出來的蛋白,可以知道,哪些蛋白可能在機體內與你感興趣的蛋白有相互作用。

免疫共沉澱中protein a和protein g用一個可以嗎

6樓:匿名使用者

最大的區別就是 gst pull-down技術是利用谷胱甘肽介質和gst融合標籤蛋白質之間相互作用結合的。 免疫共沉澱技術是利用了protein a或者g介質和igg之間相互作用結合的。 這是兩組不同的配基與蛋白吸附

protein a column 是什麼原理

7樓:本人不在這

是這樣protein a的柱子是一種親和柱,我不知道你說的protein a column是指定量的上hplc的分析柱還是純化用的上akta得柱子,但是原理是一樣的。使用protein a親和那麼你的目標物一定是含fc片段的融合蛋白或者抗體,他們在中性ph條件下會和protein a特異性吸附,被protein a牢牢抓住,然後你不需要的雜質會隨著流動相流穿,當雜質全部流走以後,改變ph使ph降低(一般3-4),你的目標物與protein a的特異性吸附會消失,你的目標物就被洗下來了,你要的東西就比較純了。

免疫共沉澱,就是ip,中用的瓊脂糖珠是什麼東西,比如說我要做a蛋白的相關蛋白,

8樓:匿名使用者

ip是研究兩個蛋白或者一個片段和一個蛋白之間有沒有相互作用的 pull down是研究是否存在該蛋白的 至於前面的問題我還不太確定 應該是作為固相載體分離蛋白的

9樓:匿名使用者

protein a/g 能夠和抗體的fc段結合,抗體和目的蛋白結合,目的蛋白和與其作用的蛋白結合

瓊脂糖珠技術是做什麼的? 5

10樓:灬芸丿丶

用來進行植物原生質體的培養的一種方法

11樓:匿名使用者

沒有聽書過,我只聽說過瓊脂糖凝膠電泳技術。

染色體免疫共沉澱中用的蛋白a/g瓊脂糖可以自己做嗎?該如何製作?難道只能買公司的?

12樓:匿名使用者

可以買一個啊,上海生工就有賣的,產品編號 bs694

免疫共沉澱的優點

13樓:北京索萊寶科技****

(1)相互作用

的蛋白質都是經翻譯後修飾的,處於天然狀態;

(2)蛋白的相互作用是在自然狀態下進行的,可以避免人為的影響;

(3)可以分離得到天然狀態的相互作用蛋白複合物。

免疫共沉澱定義:

免疫共沉澱(co-immunoprecipitation)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用於研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。其原理是:

當細胞在非變性條件下被裂解時,完整細胞記憶體在的許多蛋白質-蛋白質間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質x的抗體免疫沉澱x,那麼與x在體內結合的蛋白質y也能沉澱下來。這種方法常用於測定兩種目標蛋白質是否在體內結合;也可用於確定一種特定蛋白質的新的作用搭檔。

免疫共沉澱的實驗過程:

(1)轉染後24-48 h 可收穫細胞,加入適量細胞裂解緩衝液(含蛋白酶抑制劑),冰上裂解30min, 細胞裂解液於4°c, 最大轉速離心30 min後取上清;

(2)取少量裂解液以備western blot分析,剩餘裂解液加1μg相應的抗體加入到細胞裂解液,4°c緩慢搖晃孵育過夜;

(3)取10μl protein a 瓊脂糖珠,用適量裂解緩衝液洗3 次,每次3,000 rpm離心3 min;

(4)將預處理過的10μl protein a 瓊脂糖珠加入到和抗體孵育過夜的細胞裂解液中4°c緩慢搖晃孵育2-4h,使抗體與protein a瓊脂糖珠耦聯;

(5)免疫沉澱反應後,在4°c 以3,000 rpm 速度離心3 min,將瓊脂糖珠離心至管底;將上清小心吸去,瓊脂糖珠用1ml裂解緩衝液洗3-4次;最後加入15μl的2×sds 上樣緩衝液,沸水煮5分鐘;

(6)sds-page, western blotting或質譜儀分析。

注意的問題:

(1)細胞裂解採用溫和的裂解條件,不能破壞細胞記憶體在的所有蛋白質-蛋白質相互作用,多采用非離子變性劑(np40或triton x-100)。每種細胞的裂解條件是不一樣的,通過經驗確定。不能用高濃度的變性劑(0.

2%sds),細胞裂解液中要加各種酶抑制劑,如商品化的cocktailer。

(2)使用明確的抗體,可以將幾種抗體共同使用。

(3)使用對照抗體:

單克隆抗體:正常小鼠的igg或另一類單抗

兔多克隆抗體:正常兔igg

14樓:孤獨患者

(1)相互作用的蛋白質都是經翻譯後修飾的,處於天然狀態;

(2)蛋白的相互作用是在自然狀態下進行的,可以避免人為的影響;

(3)可以分離得到天然狀態的相互作用蛋白複合物。

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