1樓:北京索萊寶科技****
細胞的接種密度過小,細胞的滯留期就會比較長,如果接種密度比較大,則很快就能進入對數期.
細胞生長曲線有哪些影響因素
2樓:匿名使用者
細胞生長曲線是測定細胞絕對生長數的常用方法,也是判定細胞活力的重要指標,是培養細胞生物學特性的基本引數之一。一般細胞傳代之後,經過短暫的懸浮然後貼壁,隨後度過長短不同的潛伏期,即進入大量**的指數生長期。在細胞達到飽和密度後,停止生長,進入平頂期,然後退化衰亡。
為了準確描述整個過程中細胞數目的動態變化,典型的生長曲線可分為生長緩慢的潛伏期,斜率較大的指數生長期,呈平臺狀的平頂期及退化衰亡4個部分。以存活細胞數(萬/ml)對培養時間(h或d)作圖,即得生長曲線。
細胞生長曲線和細胞增殖實驗的區別
3樓:廢柴八號
細胞生長曲線是對細胞的培養過程計數,得到的細胞數量繪製曲線得到延遲期、對數生長期、穩定期和衰亡期四個階段。
細胞增殖是對細胞在對數生長期(活性最高)的時候進行傳代的實驗。
il-2活性測定問題 20
4樓:天哪都被註冊了
結果統計學處理
所有數值以x±s表示,應用spss軟體進行方差分析,p<0.05時為相差顯著,p<0.01時為相差非常顯著。
可以以時間為橫軸,光吸收值為縱軸繪製細胞生線,專門公式求ic50。或計算抑制率。細胞死亡率%=od對照組-od實驗組/od對照組
excel表中可以做兩兩比較的t-test,這個你可以參考一下;你的資料應該用多個樣本均數的t-test,方差分析也可。用的軟體是spss或者sas。
孔板的重複利用:
培養板要用好的(最好進口板),不好的板或重複利用的板只可做預實驗。一般貼壁生長的細胞用重複利用的培養板效果不是很好,因為培養板表層在生產時塗有一層促進細胞貼壁的物質,在清洗後多半會失去。懸浮或是半懸浮生長的細胞還可以。
建議不要用太多次,即使是進口的板子使用次數也不要超過3次,底值最好在測得值的1/3一下。
強烈建議培養板不要重複使用:1、泡酸是可以,但是泡完酸的板子很不利於細胞的生長,會出現帖壁不好,細胞生長緩慢等情況.2、這樣的板子消毒滅菌很不徹底,如果有萬一,則因小失大.
3、重複用的板子洗不乾淨在培養過程中易出現雜質.
重複利用時
做法1:
洗淨後用2%naoh浸泡4小時,再用1%稀鹽酸浸泡4小時,沖洗15遍,蒸餾水沖洗3遍,烘乾,uv照射過夜(紫外2小時以上消毒即可)
做法2:
泡酸2-4小時,老師讓我們別超過4小時,(普通的玻璃儀器是過夜)。撈出,沖洗乾淨,烘乾後,uv 照射過夜。估計跟其他收集在一起,鈷60照射消毒.
做法3:
1.做完mtt後用大水流盡量將板衝淨,然後用洗衣粉水泡幾個小時(小心最好讓洗衣粉先化開)。2.
用自來水衝淨洗衣粉水,倒扣晾乾.3.重鉻酸鉀加濃硫酸配成的酸液中浸泡過夜泡洗液(六小時以上即可)後自來水洗淨(20次左右)每個孔都要處理4.
用去離子水沖洗3遍,雙蒸水沖洗3遍,烤乾5.超淨臺中紫外線照射2個小時左右,就可以用了,不可以高壓。
做法4:
1、測完值的96孔板甩掉孔內培養液,放入超聲中超10-30分鐘,晾乾(或烘乾)備用。
此步驟可最大程度的洗去汙垢及細胞。
2、每孔加入50-100ul的胰酶(0.05%),我一般加60ul,加完胰酶後水平振盪96孔板以使胰酶均勻覆蓋於細胞表面,室溫下放置至細胞被消化脫落為止。假如你想消化快一點的話可將96孔板放到37度培養箱內(胰酶在37度時的活力最大)。
對於頑固貼附在壁上的細胞,此步驟最為有效。
3、甩掉胰酶,自來水下衝洗,晾乾(或烘乾)備用。
如果不烘乾就泡酸,那麼96孔板殘留的水分將稀釋酸液,長期以往泡酸的效果下降。
4、將晾乾的96孔板泡酸(中強酸)過夜,撈起後自來水下衝洗10遍;雙蒸水沖洗3遍。三蒸水沖洗3遍。烘乾備用。泡酸時特別注意時間不要太長了,否則板子變黃,影響最後的od值的測定。
5、做實驗前,96孔板至少在紫外燈下照射30分鐘,但不能長期照射。紫外線長期照射可使板變黃,我的兩塊板放在超靜臺上忘了拿出來,一直照了兩個星期,等我從超靜臺上取出板已經變成黃色。
注:1、在實驗中若你測得某一個孔的數值偏高,雖然有很多因素會導致數值偏高,但是如果是板底的汙點引起的話你可以消除。拿出96孔板擦一擦值偏大孔的板底部,再測值。
你會發現孔高的值又會到正常水平。因為咱們做實驗時手不可避免的接觸96孔闆闆底留下痕跡,這些痕跡就會使吸光度升高。
2、96孔板洗的次數多了,板底自然留下劃痕,這就會導致讀數的不均而影響實驗結果。你不妨在做實驗前測一次96孔板的值(此值為初值),實驗測得的為後值。後值減去初值就接近實驗的真實值。
請教統計學問題-細胞生長曲線比較 100
5樓:匿名使用者
利用已有的曲線,我認為你可以檢驗新採集到的細胞數量與時間的關係是否符合已有曲線.
具體做法,可以採用chi-square卡方擬合優度檢驗.
若時間序列t1,t2,....tn與實驗結果對應的細胞數量為:n1,n2,....nn
將時間代入已有曲線方程,可得對應的細胞數量為:n'1,n'2,...n'n...
則chi-square=[(n'1-n1)^2/n'1+(n'2-n2)^2/n'2+...+(n'n-nn)^2/n'n 近似服從(n-1)的卡方分佈..取檢驗顯著性水平為a
拒絕域:
6樓:董水連
一定量的微生物,接種在適合的新鮮液體培養基中,在適宜的溫度下培養,以菌數的對數作縱座標,生長時間作橫座標,做出的曲線叫生長曲線。一般可分為延遲期、對數期、穩定期和衰亡期四個時期。
不同的微生物有不同的生長曲線,同一種微生物在不同的培養條件下,其生長曲線也不一樣。你這幾種細胞的生長曲線,微生物種類不同,培養條件不同,可以說比較時是有誤差的.但是,你可以比較一下它們從接種到衰亡時間的長短,各種細胞延遲期、對數期、穩定期 、衰亡期的長短來比較它們各自的生長情況。
延遲期短的話,生長效率高。
怎樣做細胞密度與od值的關係曲線
7樓:你畫餅充飢
用od值必須注意,只有透光率
在20%~80%之間,濃度與od值的關係才是呈線形的。2、由於用比濁法不能分辨死菌活菌,所以要防止在生長後期死菌與活菌相混合導致od值假增高,我們採用的方法是:第一次測定生長曲線的時候,在測定od值的時候,同時採用臺盼藍染色法作活細胞計數,從而得到一個修正資料。
以後在發酵時就可以只測od值來監測生長狀況了。另外,也有人採用同時接種平板的方法得到修正值的,我覺得太麻煩花時間的說。
做mtt時細胞的接種密度對實驗結果有什麼影響呢?
8樓:
你的解釋是有道理的。
處於對數生長期的細胞對藥物是最敏感的,而對數生長期的細胞就是似滿非滿,長得太滿的細胞肯定已過對數生長期,你要對接種的細胞濃度摸索一下,細胞生長的速度與達到對數生長期的時間有關,不同濃度達到對數生長期的時間不同,也就是說,你用藥的時間與接種的細胞濃度有關。
另外,及時給細胞換液,對細胞的生長也很重要。一般隔一天要換一次頁,除非細胞特別少。
祝你成功!
9樓:匿名使用者
是的,在mtt濃度不變的情況下,細胞的多少直接影響到甲攢的形成,甲攢越高,則吸光值越大,細胞活性越強,凋亡率越低。
10樓:捷渺司寇炳
如果細胞生長良好25000-30000就可以,你的接種密度不算太高
我養的懸浮細胞在密度為40000的時候,測出的od值太高
細胞生長曲線的mtt法
11樓:情義光頭
1.製備1 ml細胞懸液。
空白對照以1 ml培養基代替細胞懸液。加入0.1 ml mtt於37℃孵育4 h。使mtt還原為藍紫色甲月贊結晶。
2.加1 ml dtw脫色液,37℃至少靜置30 min(甚至過夜),使甲質顆粒充分溶解。
3.吸取200 μl該溶解液至96孔板孔中,在酶標儀上讀取od值,檢測波長570 nm,參考波長630 nm。
4.每隔24 h測量一個點,每個點為3個平行樣品的平均值。
請問做生物實驗時如何選擇細胞接種數?
12樓:匿名使用者
樓主你好,您問的如何選擇細胞接種數?
你可根據細胞傳代培養過程中接種數及細胞生長週期進行計算,細胞接種數因細胞的不同而不同。
還有細胞生長曲線測定週期一般是一個星期。
來自麒盟生物回答!
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