1樓：匿名使用者
1、 裂解液要預熱,以抑制dnase,加速蛋白變性,促進dna溶解.
2、 酚一定要鹼平衡.苯酚具有高度腐蝕性,飛濺到**、粘膜和眼睛會造成損傷,因此應注意防護.氯仿易燃、易爆、易揮發,具有神經毒作用,操作時應注意防護.
3、 各操作步驟要輕柔,儘量減少dna的人為降解.
4、 取各上清時,不應貪多,以防非核酸類成分干擾.
5、 異丙醇,乙醇.naac,kac等要預冷,以減少dna的降解,促進dna與蛋白等的分相及dna沉澱.
6、 提取dna過程中所用到的試劑和器材要通過高壓烤乾等辦法進行無核酸酶化處理.
7、 所有試劑均用高壓滅菌雙蒸水配製.
rnase-free的名稱是什麼？有什麼作用
2樓：
dna酶，其中保證不會有rna酶汙染的，因此，可以用於降解rna樣品中汙染（混入）的dna。比如提取的rna中可能混有基因組dna或者對細胞人為轉染質粒後，提取的rna中質粒dna的汙染很嚴重，可以加dnasei(rnase-free)去除dna
溶解dna的時候沒有用buffer,而是直接用的雙蒸水，請問影響大嗎
3樓：匿名使用者
影響不大。放在冰箱冷凍儲存的話，放幾年都沒問題
4樓：匿名使用者
分裝凍來
存，時間可以自
很久。-20c放個一年半載的不成問題bai。
但是如果du時間長了，例
zhi如超過3個月了，有特別重dao要的實驗，使用之前還是需要跑個電泳測個濃度什麼的再用。不然萬一部分降解就影響實驗結果了。
如果只是一般的實驗，就直接用了再說。
溶解dna的ddh2o的ph怎麼調
5樓：匿名使用者
品試劑及耗材： —— 液氮 —— 提取緩 衝液：500 mmol/l nacl, 100 mmol/l tris-hcl ph8, 50 mmol/l edta ph8，10 mmol/l 2-巰基乙醇（用前加入） 。
rna提取試劑盒的rnase free ddh2o是不是都要加depc水
6樓：北京索萊寶科技****
一般rna提取試劑盒裡的rnase-free ddh2o就是已經經過depc處理的水，具體還是要看一下說明書。
一個rna提取樣品（以1ml trizol為例）只需要250+20ul depc水。
紫外線對rnase-free h2o有影響嗎
7樓：匿名使用者
指的是無rna酶,rnase是rna酶.多是在提取rna的時候用的東西,像rnase-free水,提rna的時候怕rna降解所用的. 核酸分解的第一步是水解核苷酸之間的磷酸二酯鍵，在高等動植物中都有作用於磷酸二酯鍵的核酸酶。
rna的測序原理及方法！^~^
8樓：匿名使用者
next generation sequencing就直接測rna，傳統的還是先轉cdna，原因麼應該是rna比較脆弱啦。。。cdna比較穩定。不過弊端還是很多的比方一個很突出的就是3』端bias。。
所以現在有了next generation 的rna seq。原理是一樣的不過就是直接測rna了。
third generation裡邊就開始測single molecule了，像前兩天ibm說的那樣哈哈。。。。。
9樓：冷血殘心
dna和rna的測序方法
dna或rna鹼基序列測定方法，包括步驟：
1）將dna或rna單鏈固定於平面支援物上；
2）將一束鐳射聚焦於一條固定化的單鏈上；
3）通過加入含有（i）用於合成dna互補鏈的腺嘌呤、胞嘧啶、鳥嘌呤、胸腺嘧啶四種核苷酸的混合物或用於合成rna互補鏈的腺嘌呤、胞嘧啶、鳥嘌呤、尿嘧啶四種核苷酸的混合物和（ii）一種聚合酶的溶液，用來產生上述被固定的、被聚焦的單鏈的dna或rna互補鏈，插入到互補鏈中的每一個被髮游標記物標記了的核苷酸用單分子檢測器進行檢測，以及在下一個被髮游標記物標記的核苷酸插入之前對前一個被髮游標記物標記的核苷酸的發光訊號進行檢測。
10樓：無語翹楚
細胞中的rna可以分為信使rna、轉運rna和核糖體rna三大類，不同組織總rna提取的實質就是將細胞裂解，釋放出rna，並通過不同方式去除蛋白，dna等雜質，最終獲得高純度rna產物的過程。
rna 提取流程
1. 樣品處理
從各種不同**樣品（如細菌、酵母、血液、動物組織、植物組織和培養細胞）,或同一**樣品的不同組織（如植物幼嫩葉片、成熟根、莖等）中提取高質量的rna，因細胞結構及所含的成分不同，樣品預處理的方式也各有差異。
樣品的要求：
最好使用新鮮的樣品或取樣後立即在低溫（-20℃或-70℃）冷凍儲存的樣品，避免反覆凍融，因為這會導致提取的rna降解和提取量下降。
樣品預處理方式：
植物材料-液氮研磨
動物材料-勻漿、液氮研磨
細菌-溶菌酶破壁
酵母-液氮研磨、玻璃珠處理、混合酶破壁
2. 細胞裂解
異硫氰酸胍/苯酚法（trizol）
這是一種傳統的rna提取方法，適用於大部分動植物材料，但對於次生代謝產物較多的植物材料提取rna效果較差。異硫氰酸胍能使核蛋白複合體解離，並將rna釋放到溶液中，採用酸性酚-氯仿混合液抽提，低ph值的酚將使rna進入水相，而蛋白質和dna仍留在有機相，從而可以完成rna的提取工作。
該法應用非常廣泛，適用於包括動物組織、微生物、培養細胞等在內的各類動物性材料，同時還適用於次生代謝物較少的植物性材料，如幼苗、幼葉等。該法主要應用在動物組織和培養細胞的rna提取中。
胍鹽/ β- 巰基乙醇法：
適用於各種不同動物材料和次生代謝物少的植物材料。
在這種方法中，胍鹽使細胞充**解，β-巰基乙醇作為蛋白的變性劑在實驗全程中可以抑制rnasea的活性，保護rna不被降解。
我公司的「green 」系列總rna 提取試劑盒是基於這種方法開發的產品，分別適用於各類不同的材料。此係列產品的具體實驗步驟和適用範圍在實驗技術手冊中有詳細介紹，實驗者可根據自己的需要進行選擇。
其它方法：
有些植物材料多糖多酚含量較高，如植物果實，番茄的葉子等，有些植物木質化程度較高，如根莖等組織。針對這類材料本公司推出了一種全新的植物總rna提取試劑，該試劑特別適合於從富含多糖、多酚、澱粉的材料中提取純度高、完整性好的總rna，有關的具體步驟將在分論中詳細介紹，實驗者可根據自己的需要進行選擇。
3. rna 純化及獲得
純化要求
rna樣品中不應存在對酶（如逆轉錄酶）有抑制作用的有機溶劑和過高濃度的金屬離子。避免其它生物大分子如蛋白質、多糖和脂類分子的汙染。排除dna分子的汙染。
純化方法及沉澱
方法一：有機溶劑抽提法
氯仿抽提
在使用rna提取試劑進行rna提取時，常使用氯仿進行抽提，以去除蔗糖、蛋白等雜質，並促進水相與有機相的分離，從而達到純化rna的方法。在本公司的提取rna的產品中，與trizol同型試劑法及其衍生試劑盒。
沉澱氯仿抽提rna後，一般採用了異丙醇或乙醇來沉澱水相rna。加入0.6倍水相體積的異丙醇或與水相等體積的異丙醇，室溫沉澱20-30分鐘，高速離心，可獲得rna沉澱。
洗滌沉澱
加入無rnase的75%乙醇，將rna沉澱振盪懸浮，使rna沉澱中的鹽離子被充分溶解。然後再離心10-30分鐘。再次沉澱rna。
離心後，小心倒掉上清（注意不要倒出rna沉澱），隨後快速離心1-2秒，將殘留在管壁上的乙醇手機到管底後，用小槍頭吸淨，超靜臺中風乾1-2分鐘（注意不要晾得太乾，否則rna沉澱不易溶解）。
溶解沉澱
加入適量rnase-free ddh2o溶解rna沉澱。
方法二：矽基質吸附法
隨著實驗方法的改進，現已發展出一種採用吸附材料純化核酸的方法。目前較常見的有：矽基質吸附材料、陰離子交換樹脂和磁珠等。
矽基質吸附材料因其具有可特異吸附核酸，使用方便、快捷、不使用有毒溶劑如苯酚、氯仿等優點，成為核酸純化的首選。
本公司生產的總rna提取試劑盒（zp403-zp407）和greenspin系列總rna提取試劑盒即採用矽基質吸附達到rna分離純化目的，通過專一結合rna的離心吸附柱和獨特的緩衝液系統，使樣品在高鹽條件下與矽膠膜特異結合，而蛋白、有機溶劑等雜質不能結合到膜上而被洗脫，鹽類則被含有乙醇的漂洗液洗滌，最後用rnase-free ddh2o將rna從矽膠膜上洗脫下來。
rna提取無菌水需要用depc處理麼
11樓：匿名使用者
rna提取
無菌水需要用depc處理
一般rna提取試劑盒裡的rnase-free ddh2o就是已經經過depc處理的水，具體還是要看一下說明書。 一個rna提取樣品（以1ml trizol為例）只需要250+20ul depc水。
rna提取的時候,一定要注意防止rna酶作用.
第一點,樣本處理和存放最好都放負80冰櫃.
第二點,實驗過程中你可以使用depc水泡過的槍頭,離心管,保持手套乾淨,帶好口罩,不要說話.
第三點,假如你用trizol提取rna,75%的乙醇也最好採用來菌的depc水來配製.晾乾酒精這一步時間不要太長.
第四點：瓊脂糖凝膠電泳,專漕專用,使用新的電泳緩衝液tbe.
還有呢,也可以在實驗前,採用rnase zap噴噴桌面,也能有一定程度上去除rna酶的影響.
一般提取的時候多多注意,應該問題不大.
糊弄用可以,但是如果是自己做實驗的話最好還是參考一下比較好的文獻總結會比較好!
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