已知一段植物DNA序列,如何通過分子生物學的方法獲得該序列所在的基因全長

2021-08-29 10:47:11 字數 1568 閱讀 5425

1樓:johnny王子

這個不難吧,只要有人曾經側過,

首先你得知道你的這段dna序列的密碼,

然後 ncbi,美國國立生物技術資訊中心(http://www.ncbi.

nlm.nih.gov/)**上blast一下就可以了,如果你對這個**熟悉或者瞭解過過生物資訊學,這個很順手的,你說的1,這個方法可以解決,而且很詳細,2,也沒問題,4,這個裡面的相關資料也很詳細,

你說的3,這個是基礎知識,基因組dna有內含子和外顯子之分,當轉錄成mrna後,就沒有內含子了,剩下的全是外顯子,也就是起作用的部分,這時候,我們認為的對mrna進行反轉錄,得到雙鏈的互補dna(cdna),也就是cdna是去掉內含子的,基因組dna是既有內含子又有終止子的,知道了嗎

2樓:冬日咖啡雪

根據目的序列的全長設計一對引物

提取該基因所在生物體的基因組dna,或提取mrna,反轉錄成cdna以上部得到的dna為模板,進行pcr反應,擴增擴增產物跑瓊脂糖凝膠電泳,切膠**

即獲得了全長dn**段

3樓:匿名使用者

因為真核生物一般轉錄產物為單順反子,利用其轉錄產物hnrna反轉錄出cdna,然後雜交確定。

利用est和生物資訊學及細胞分子生物學技術研究某基因的功能,試設計技術路線

4樓:

首先,est序列的測序,得到該基因的est片段其次,生物資訊學,用go或者kegg,分析該基因的功能分類,所在代謝途徑等;通過ncbi blastn,blastx,tblastn等比對與該基因同源性較高的基因序列和可能功能;通過expasy研究蛋白的特點,二級結構,**結構等。

之後,根據已得到的資訊,依據可能的功能設計細胞分子生物學實驗,例如,1利用已知序列,通過race方法獲得該基因的cdna全序列,通過巢式pcr或者tail pcr的方法獲得全基因組序列及promotor序列

2構建過表達載體,在生物體內過表達該基因,看是否獲得可見表性3構建反義rna載體,或者rnai載體,使該基因的表達沉默,看是否獲得可見表性

4通過同源重組的方法,敲除該基因,看是否獲得可見表性5在該基因缺失的突變生物體中,過表達該基因,看錶效能夠得到互補t突變6在該基因啟動子後接上報告基因,觀察該基因的表達位置7在將該基因與報告基因後,進行亞細胞定位

8採用real-time-pcr的方法,觀察該基因的表達模式9採用基因晶片的方法,觀察與該基因有關的基因10採用酵母雙雜交的方法,尋找與該基因相互作用的蛋白。

等等等等

5樓:羽動一生

先利用est在網上找出你要研究的那個物種的dn**段,看看在別的物種中它具有啥功能,根據保守性在你所研究的物種中應該也差不多。把你的基因正義和反義片段分別匯入你所研究的物種中,看看對它用啥影響就行啦。你要是沒有這個基因的全長那就麻煩了。

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