1樓:為青生物
先找復到基因的mrnax序列。
引物設計引數制:
a引物長度一般在20bp左右bai,上下游引物鹼du基長度不要相差超zhi過4個鹼基。dao
b引物退火溫度一般在58度,不同軟體tm使用不同的演算法,primer3,primer
5,primer
6,primer
express等一般可以設定在55-58度,beacon
design可以設定在65左右。
cgc含量一般沒什麼特殊要求,40-60最好,如果不好設計,30-80也是可以的。
d產物長度在100-150,80-200也可以,不要在50bp左右,那樣和引物二聚體不好區分,超過200bp可能會影響pcr擴增。
e軟體給出的引物不能有髮卡結構和超過3-4個鹼基的匹配,特別是3`端不能有鹼基匹配,那樣更容易形成二聚體。
f引物設計好以後,在ncbi上做一個primer-blast,檢測一下是否有非特異性擴增。
如何用ncbi設計引物以及驗證引物
還是用primer premier來設計吧 然後去ncbi上blast一下看下特異性 如何利用ncbi中的primer blast設計引物 引物大嗎?如果二十幾個bp以上的話,能查出來 正向引物不變,反向 回引物找反向互補序列,就是說答aatcggatcctcj就要翻成gaggatccgatt 把這...
熒光定量PCR引物設計為什麼要在100 200bp之間
樓主說的是擴增bai子,即兩引物目du標位點之間的序zhi列長度。daopcr過程中,擴增專就跟修路一樣,越長越屬費工。在能夠保證特異性的情況下,當然是越短越有效率,100 200bp就是綜合兩方面的考慮而建議的最佳擴增子長度吧。其實有的人會說50 250bp,這跟各人經驗和具體實驗條件有關。1 熒...
人們根據什麼原理,設計出了什麼,人們根據什麼生物創造了什麼發明物
蜂鳥 蜻蜓 雙翼 魚膘 潛艇 海豚 聲納 1 由令人討厭的蒼蠅,仿製成功一種十分奇特的小型氣體分析儀。已經被安裝在宇宙飛船的座艙裡,用來檢測艙內氣體的成分。2。從螢火蟲到人工冷光 3。電魚與伏特電池 4。水母的順風耳,仿照水母耳朵的結構和功能,設計了水母耳風暴 儀,能提前15小時對風暴作出預報,對航...