1樓:匿名使用者
解決辦法:bai1、cla1是一個比較不常見的酶,du可能酶切體系和
zhiecor1的緩衝dao體系不一樣,試著分別回酶切,就是先切cla1,然答後純化後切ecor1;或者查詢哪個酶的酶切效率高些,那個後切;2、3個小時可能太短了,我一般都是5個小時,或者過夜;3、可能是你菌挑錯了,或汙染了,重新調菌或者把原來構建成功的質粒進行轉化,再酶切。希望對你有幫助。
2樓:郭海強
可能是你酶的問題哦,加入酶失活了,切一個星期都沒用,建議換另外實驗室的試一下。
3樓:匿名使用者
你的引物含有clai的酶切位點嗎?用載體上的其他酶切位點,雙酶切鑑定下看看。也許酶有問題
如何將目的基因連線到t載體進行測序
4樓:匿名使用者
如何將目的基因連來
接到t載體進行源測序
解決辦法:1、cla1是一個比較不常見的酶,可能酶切體系和ecor1的緩衝體系不一樣,試著分別酶切,就是先切cla1,然後純化後切ecor1;或者查詢哪個酶的酶切效率高些,那個後切;2、3個小時可能太短了,我一般都是5個小時,或者過夜;3、可能是你菌挑錯了,或汙染了,重新調菌或者把原來構建成功的質粒進行轉化,再酶切.
菌落pcr結果正確,為什麼搖菌提質粒酶切不對?
5樓:瑞棟璇淼
通用來引物加特異性引物源菌落pcr+質粒雙酶切 均陽bai性 具特異性證明(縫拼接除du外)
認雙酶切實驗能夠zhi更嚴謹驗證重組實dao驗 更具說服力基組測序知道您重組質粒否酶切解環與線性空載體進行比 瓊脂糖凝膠電泳本身存定範圍內誤差 若目片段 立體dna結構瓊脂糖凝膠誤差放 能影響實驗結
根據您實驗結 我猜測重組質粒陰效能性更些
既已經抽提質粒 妨做質粒pcr雙酶切 品塊凝膠內平行跑結目
我的目的片段連t載體後,挑單克隆搖菌,用菌液pcr能p出目的片段,再提質粒用ecor1做酶切,片段變小怎麼回
6樓:南霧嶺後
片段變小?
你的目的片段裡有沒有這個酶切位點?你的目的片段有多大?
建議用雙酶切,將片段切出後電泳,如果有該片段,在電泳時就一目瞭然了。
7樓:匿名使用者
不會有兩個ecori酶切位點吧,正好酶切下一小段片段下來......
8樓:還月月
你要看看你的質粒上是不是有兩個酶切位點那樣的話就會切下一小部分,由於鹼基很少,所以電泳效果是看不出來的
為什麼我的目的基因連線克隆載體轉化、提質粒後,酶切鑑定正確,而質粒pcr和菌液pcr鑑定都不正確呢?著急
9樓:匿名使用者
不管酶切還是pcr,都是間接的結果。要確定克隆的正確,一定要測序的啊。
你測個序,問題就迎刃而解了。到底是什麼問題也就清楚了。
10樓:匿名使用者
因為 轉化過程你沒出來好 加點 kml 再轉化 提質後 分別切2 這樣就正確了
連線克隆載體,提取質粒後目的基因仍然在,怎麼回事
11樓:
提取質粒後目的基因仍然在是什麼意思?
是說應該被替換了嗎?
如果是沒有連線成功考慮
載體酶切是否完全;
載體與目的片段的比例是否合適,推薦載體:目的片段=1:3感受態細菌的效率如何,保證感受態效率達到10^8以上對於連線轉化非常重要。
12樓:匿名使用者
目的基因仍然在,是什麼意思?仍然在克隆載體上?不在就不正常了好不好
基因工程中，載體與載體連線物，目的基因與目的基因連線物，目的基因與載體連線物分別是指什麼，滿意的話
經過同一種限制性內切酶切割後會產生相同的粘性末端，所以目的 基因可內與目的基因連線，載體可與載容體連線，也有目的基因和載體連線。用限制性內切酶切了以後，讓片段自己連線，就會出現三種連線方式，然後我們選擇出來需要的重組片段 基因工程構建基因表達載體的問題 我估計這個構建是利用你提到的酶切位點在你所說的...
（2）中的「目的基因 目的基因載體 載體」是說它們自己和
朋友你好！將目的基因克隆進某載體的基本過程如下 擴增目的基因 此時的目的基因連在舊載體上，且基因兩側有多個限制性酶切位點，即處在多克隆位點內，整體呈環形，因為也只有正常環形dna即質粒能在細菌內擴增 提純目的基因，並利用單酶切或雙酶切將其切下 此時目的基因呈線性，且兩端是酶切過後留下的粘性末端 酶切...
為什麼我的目的基因連線克隆載體轉化 提質粒後，酶切鑑定正確，而質粒PCR和菌液PCR鑑定都不正確呢？著急
不管酶切還是pcr，都是間接的結果。要確定克隆的正確，一定要測序的啊。你測個序，問題就迎刃而解了。到底是什麼問題也就清楚了。因為 轉化過程你沒出來好 加點 kml 再轉化 提質後 分別切2 這樣就正確了 菌落pcr會出現假陽性結果嗎 高手們好。最近做酶切連線轉化，最後做鑑定時，以菌落為模板進行pcr...