1樓：匿名使用者
我想你說的「對照樣品」應該是用於製作標準曲線的標準品（常用質粒構建的重組dna），稀釋4-5個梯度，可以做標準曲線。所謂雙曲線，就是用這個所謂的「對照樣品dna」，一個用來做目的基因的標準曲線，一個用來做內參基因的標準曲線。
2-△△c中處理前和處理後，我沒有明白。
2樓：虢善問木
熒光定量pcr會加入帶有熒光基團的探針，探針是能和目的基因結合的單鏈dna，如果合成雙鏈dna後，熒光基團就會啟用發光，所以實時檢測反應物的熒光強度，反應的就是雙鏈dna的濃度，由於合成雙鏈dna的速率和模板濃度有關，所以和參考曲線比較以後是可以計算出模板的相對濃度，當模板是訊號rna是，其反應的就是基因發達的量。
實時定量pcr中用△ct歸一法的對照組標準差是零嗎
3樓：匿名使用者
通常copy情況下，我們認定bai為15到35ct比較合理，超過du35個ct那麼就算它沒有擴增了，如果15之前
zhi起dao峰，那麼就是模板濃度太高所引起的
在熒光定量pcr技術中，有一個很重要的概念 —— ct值。c代表cycle，t代表threshold，ct值的含義是：每個反應管內的熒光訊號到達設定的域值時所經歷的迴圈數
-△△ct是什麼意思
4樓：匿名使用者
在做定量pcr的時候，先比較內參的ct值的差別（相減，delta ct）。然後再比較目的基因
專的ct值差別 （還是屬相減，delta ct）。然後再把得到的兩個delta ct進行相減，得到最後的結果△△ct.
計算基因表達倍數的差別時，算為2的△△ct方。前面是否加減號，取決於你一開始的時候做減法的時候那個放在前面。
我想問一下熒光定量pcr法用2-△△ct計算相對定量的問題
5樓：
做了一個實驗，內部參考電壓可以得到幾個ct值，會得到多個目標基因。在這種情況下，根據ct值的平均值，將得到的比率（相對量）。
實驗肯定不是唯一的一次，至少重複3次。這將是一個倍數的3個或更多，得到。 3個以上的值，你可以計算平均值和標準偏差的。
6樓：塔渟盛淑賢
你一次實驗做的資料，內參可以得到幾個ct值，目的基因也會得到幾個。這樣的話，根據平均的ct值，就會得到一個倍數(相對量)。
實驗肯定不會只做一次吧，至少重複3次以上。這樣就會得到3個以上的倍數了。3個以上的數值就可以算均數和標準差了。
為什麼熒光定量pcr對照組相對錶達還會有bar值
7樓：天枰小蝌蚪吖
熒光定量pcr會加入帶抄有熒光基團襲的探針，bai探針是能和目的基因結合的單
鏈dudna，如果合成雙鏈dna後，zhi熒光基團就dao會啟用發光，所以實時檢測反應物的熒光強度，反應的就是雙鏈dna的濃度，由於合成雙鏈dna的速率和模板濃度有關，所以和參考曲線比較以後是可以計算出模板的相對濃度，當模板是訊號rna是，其反應的就是基因發達的量。
請問：做熒光定量pcr時，△△ct值是什麼意思，它的計算公式是什麼？ 20
8樓：禾鳥
△△ct是熒光定量計算公式的簡化形式，用於比較不同樣品之間的差別或變化比率。
ct=-1/lg(1+ex)*lgx₀+lgn/lg(1+ex)，其中，n為擴增反應的迴圈次數，x₀為初始模板量，ex為擴增效率，n為熒光擴增訊號達到閾值強度時擴增產物的量。△ct(n)=ct（目的基因）-ct（內參基因）；△△ct(n)=△ct(n)-△ct(1)。
起始拷貝數越多，ct值越小。利用已知起始拷貝數的標準品可作出標準曲線，其中橫座標代表起始拷貝數的對數，縱座標代ct值。因此，只要獲得未知樣品的ct值，即可從標準曲線上計算出該樣品的起始拷貝數。
擴充套件資料
熒光定量pcr的原理：
熒光定量pcr技術：在pcr反應體系中加入熒光基團，通過熒光訊號不斷累積而實現實時監測pcr全程，然後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。在實時熒光定量pcr中，對全程pcr擴增過程進行實時檢測，根據反應時間和熒光訊號的變化可以繪製成一條曲線。
實時熒光定量常用的熒光化學分類有sybr green i法和tag man探針法。
ct值：c代表cycle，t代表threshold，ct值的含義是每個反應管內的熒光訊號到達設定的域值時所經歷的迴圈數。
9樓：一生一個乖雨飛
△△ct這是相對熒光定量的一個計算公式的簡化形式，用於比較不同樣品之間的差別或變化比率。
ct= -k lgx0+ b（線性方程）用這個方程可以通過ct值算出樣品的起始濃度
斜率=-1/lg(1+e)
擴增效率e=1, 斜率=-3.32
擴增效率範圍：90%-110%
斜率範圍：-3.1和-3.59之間
例如，想看a基因和b基因在某細胞系中表達量的差別，選取18s作為內參基因，就用a基因的ct值減去18s的ct值，得到△ct1，用b基因的ct值減去18s的ct值得到△ct2，然後用△ct1-△ct2=△△ct，而a，b基因的表達量差別為2（-δδct）次方。
當然這計算方法是基於熒光定量的數學計算模型簡化來的，平時使用沒什麼問題，如果兩個目的基因的擴增效率不一樣，這個計算方法是不能用的。
10樓：匿名使用者
ct= -k lgx0+ b（線性方程）用這個方程可以通過ct值算出樣品的起始濃度
斜率=-1/lg(1+e)
擴增效率e=1, 斜率=-3.32
擴增效率範圍：90%-110%
斜率範圍：-3.1和-3.59之間
△△ct這是相對熒光定量的一個計算公式的簡化形式，用於比較不同樣品之間的差別或變化比率
例如，想看a基因和b基因在某細胞系中表達量的差別，選取18s作為內參基因，就用a基因的ct值減去18s的ct值，得到△ct1，用b基因的ct值減去18s的ct值得到△ct2，然後用△ct1-△ct2=△△ct，而a，b基因的表達量差別為2（-δδct）次方，當然這中計算方法是基於熒光定量的數學計算模型簡化來的，平時隨便用用沒什麼問題，如果你的兩個目的基因的擴增效率不一樣，這個計算方法是不能用的。
11樓：匿名使用者
我這邊有關於△△ct法的相關文獻以及推導公式，方便的話可以給我留一下你的郵箱
qpcr中的相對定量和絕對定量的區別
12樓：奔馬的香香豬
絕對定量是用已知濃度的標準品繪製標準曲線來推算未知樣品的量，絕對定量不同於相對定量，我們是驗室用biog kit做pcr實驗檢測目標rna，做下來ct值在28左右，s型曲線比較典型
13樓：匿名使用者
熒光絕對定來量中標準品：指
自用含有目的基因bai的質粒，知道質du粒的分子量和zhi濃度計算出拷貝數，然後dao倍比稀釋就作為絕對定量的標準品。
獲取：把目的基因p出來，然後接到質粒上，轉染搖菌擴增，然後再抽質粒，酶切純化。
最後把純化的目的基因做個鑑定。
pcr中基因的對照組相對錶達量為1是什麼意思
14樓：龍鳳油洺月
那就是有其他的基點,或者計算方法不一樣（搬運過來的）
定量pcr中的δrn值指的是什麼啊？
15樓：團長是
δrn = r+n - r-n ,計算δrn ,其中, r+n 是表示每點測量的熒光強度, r-n 表示熒光基線強度
實時熒光定量pcr是利用熒光訊號的變化，實時檢測pcr擴增反應中每次迴圈擴增產物量的變化，通過迴圈閾值和標準曲線的分析對標本中起始模板拷貝數進行定量分析。
擴充套件資料：特點實時熒光定量pcr由於熒光物質的應用，可以通過光電傳導系統直接探測pcr擴增過程中熒光訊號的變化以獲得定量結果，克服了常規pcr的許多缺點，具有如下優勢：
①能對模板定量；
②封閉反應，無需pcr後處理，汙染少，假陽性率低；
③觀察和記錄自動化，結果直觀，避免人為判斷帶來的誤差；
④工作效率高，利於實現高通量檢測。
實時熒光定量pr的缺點表現：
①需要特殊裝置以及熒光探針，成本較高；
②不能顯示pcr產物的片段長度；
③定量準確性還有待提高。
16樓：藍色葡萄風信子
δrn 的值表示pcr過程中探針降解的量,就是pcr產物的量實時定量pcr的發明歸功於兩個重要的發現:
一是發現dna taq酶有5′ 3′外切酶活性二是利用熒光能量傳遞技術構建了雙標記寡核苷酸探針即taqman探針
在pcr過程中,這些熒光訊號可以被探測器所「即時」捕獲,電腦軟體可以通過等式
δrn = r+n - r-n 計算δrnr+n 是表示每點測量的熒光強度
r-n 表示熒光基線強度
熒光定量pcr的原理,熒光定量PCR的原理
pcr擴增時在加入一對引復物的同時制加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發射的熒光訊號被淬滅基團吸收 剛開始時,探針結合在dna任意一條單鏈上 pcr擴增時,tap酶的5 端 3 端外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團...
實時定量PCR時用的ROXrefence有什麼作用
主要用於校孔差異造誤差 實時熒光定量pcr就是qpcr嗎 實時熒光定量pcr qpcr 用什麼試劑盒比較好 加入熒游標記探針，巧妙地把核算擴增 內雜交 光譜分析和實時容檢測技術結合在一起，藉助於熒光訊號來檢測pcr產物。一方面提高了靈敏度，另一方面還可以做到pcr每迴圈一次就收集一個資料 做實時定量...
請問半定量pcr的原理和介紹，請教半定量pcr的原理及介紹
樓上的回答的蠻好的，我建議還可以使用一些分析軟體對電泳後的結果進行分析，可以得到一個相對量化的結果。我知道的軟體有quantity one 好像是這麼個名字吧 半定量反轉錄 聚合酶鏈反應 semi quantitative reverse transcription and polymerase c...