1樓：匿名使用者
先克隆目的基因，比如pcr擴增。或者直接從其他載體酶切純化找到你所要的載體，一般可用topo ta載體來直接連線pcr產物。或者使用相應的酶切對應載體
完成連線
轉染細菌，比如感受態的e coli
擴增，培養細菌
分離提純載體
原核表達實驗的操作步驟？
2樓：百度文庫精選
內容來自使用者:time王婷婷
原理：蛋白質表面部分可以使免疫系統產生抗體的區域叫抗原決定簇。一般抗
版原決定簇是由權6－12氨基酸或碳水基團組成，它可以是由連續序列（蛋白質一級結構）組成或由不連續的蛋白質三維結構組成。變性蛋白只是天然蛋白伸直的了產物，用來免疫動物具有更強的抗原性。只是天然蛋白中被包在內部的抗原決定簇也會暴露出來，如果用該變性抗原製備的抗體來檢測變性抗原是可以的，如果用來檢測天然蛋白，可能會有假陽性。
做單抗也可以，同樣道理，篩選出的單抗可能對抗的抗原決定簇處於天然抗原的內部，是
3樓：匿名使用者
操作步驟bai
（一）獲
得目的基
du因1、通過pcr方法：zhi以含目的基因dao的克隆專質粒為模板，按基因序列設計一對引物（在屬上游和下游引物分別引入不同的酶切位點），pcr迴圈獲得所需基因片段。
2、通過rt-pcr方法：用trizol法從細胞或組織中提取總rna，以mrna為模板，逆轉錄形成cdna第一鏈，以逆轉錄產物為模板進行pcr迴圈獲得產物。
（二）構建重組表達載體
1、載體酶切：將表達質粒用限制性內切酶（同引物的酶切位點）進行雙酶切，酶切產物行瓊脂糖電泳後，用膠**kit或凍融法**載體大片段。
2、pcr產物雙酶切後**，在t4dna連線酶作用下連線入載體。
詳細的操作步驟生物幫上面有的， 大腦（小鼠總
4樓：孝詠勞安安
有三種表達方式，包涵體異源蛋白表達，分泌性表達，融合型異源蛋白表達。根據對產物的不同需要，或者對錶達載體的選擇等等因素而選擇不同的表達方式！建議你到生物谷這個**看看，很有用的！
急，如何構建原核表達載體？如何構建真核表達載體？（不要具體例子） 20
5樓：匿名使用者
最簡單的就是用現有的載體就行改建，除非你自己做表達載體優化，一般實驗室都是用現成的載體，匯入目的片段那樣做得！真核表達載體就是多一個轉移片段，原理都是一樣的！
基因原核表達的詳細過程
如何構建某一個基因的原核表達載體
6樓：匿名使用者
構建表達載復體首先取決於你的實驗目制的，例bai如你的實驗是du否要求你的蛋白表達zhi出來必須可溶性蛋白，dao載體上面的標籤決定了你的純化方法，當然也決定了實驗成本，等等一系列需求。
拿帶標籤的載體為例，因為帶標籤後可以增加蛋白質的可溶性，也為純化帶來了方便，一般都會採用。標籤一般都是在目的蛋白的n端，這樣就需要考慮讀碼框的問題，一定要與前面的讀碼框保持一致。
利用酶切連線的方法連入目的載體這個應該都知道，或者用gateway系統，非常方便，我就經常用gateway載體，構建起來速度呼呼的。
基本就是這些了吧，主要就考慮選擇什麼標籤和讀碼框別錯了。
有什麼問題可以直接發信給我
原核表達載體和真核表達載體的區別
7樓：威海博銳化機
一、表達載體不同：
原核表達載體構建重組表達載體：
1、載體酶切：將表達質粒用限制性內切酶（同引物的酶切位點）進行雙酶切，酶切產物行瓊脂糖電泳後，用膠**kit或凍融法**載體大片段。
2、pcr產物雙酶切後**，在t4dna連線酶作用下連線入載體。
真核細胞表達載體之一為pegfp-n1載體，具有對方面的優點。pegfp-n1載體上攜帶有egfp蛋白表達基因。
二、表達實現方式不同：
真核表達載體具有neo基因，可以採用g418來篩選已成功轉染了該載體的靶細胞。這些特殊的結構可以實現目的基因在靶細胞內的穩定表達。
三、獲得目的基因方式不同：
pegfp-n1載體從結構上看，質粒具有很強的複製能力，可以滿足隨宿主細胞**時跟隨胞質遺傳給新生的子細胞，這是真核細胞表達載體保證目的基因穩定表達的因素之一。
原核表達載體獲得目的基因：
1、通過pcr方法：以含目的基因的克隆質粒為模板，按基因序列設計一對引物（在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點），pcr迴圈獲得所需基因片段。
2、通過rt-pcr方法：提取總rna，以mrna為模板，逆轉錄形成cdna第一鏈，以逆轉錄產物為模板進行pcr迴圈獲得產物。
8樓：匿名使用者
原核載體可以將真核基因表達，但是表達出來的蛋白是沒有活性的，因為缺少翻譯後修飾系統。。。真核的表達載體呢 由於比較大 不適合大量快速擴增，所以要在其載體上構建可以在原核生物 如大腸桿菌中複製的所需的複製原件 。。。。綜上 在應用的時候 要構建 穿梭質粒 可以穿梭於 原核和 真核 呵呵 還有就是 原核表達載體的基本元件和真核的有不同的地方 。。。。。
總覺得不夠正確答案 。。。。。有些人緣的蛋白在原核裡沒有蛋白翻譯後修飾，表達後沒有活性，這時候就得在真核裡表......
9樓：匿名使用者
主要是因為原核和真核表達系統所需的表達元件不同。
比如說啟動子，終止子在兩種表達系統中是不一樣的。
帶有真核表達元件的是真核載體，能在真核生物內表達；
帶有原核表達元件的是原核載體，能在原核生物內表達。
兩者都具有的為穿梭載體。
1)真核表達載體和原核表達載體就是能在真核生物或原核生物中表達的載體,它們一般都帶有能在真核生物或原核生物中表達的必需表達元件;
2)真核表達和原核表達的目的都是為了能夠大量獲得自己所需要的目的基因的表達產物,最好有生物活性,以便下一步的實驗需要.
3)原核表達載體一般只能在原核生物中表達外源基因,但有些穿梭載體可以分別在真核和原核生物中表達它們的表達元件.
在原核表達蛋白時，由於用的是原核表達載體pet28a，屬於卡那抗性，但忘加卡那了，這樣影響大不大?
10樓：匿名使用者
理論上影響是比較復大的，原核lb培養不加制抗生素的話，很容易出現丟失了帶有外源基因質粒的生長速度比目的菌的生長速度快得多的情況。最後的結果就是影響目的蛋白的表達量。
所以如果這個蛋白表達培養的實驗是第一次做的話，建議重做一遍以保證資料的準確。如果不是第一次做的話，可以對比下之前的表達資料驗證下是否有影響。
原核載體與真核載體
11樓：匿名使用者
主要是因為原抄核和真核表達襲系統所需的表達元件不同。
比如說啟動子，終止子在兩種表達系統中是不一樣的。
帶有真核表達元件的是真核載體，能在真核生物內表達；
帶有原核表達元件的是原核載體，能在原核生物內表達。
兩者都具有的為穿梭載體。
1)真核表達載體和原核表達載體就是能在真核生物或原核生物中表達的載體,它們一般都帶有能在真核生物或原核生物中表達的必需表達元件;
2)真核表達和原核表達的目的都是為了能夠大量獲得自己所需要的目的基因的表達產物,最好有生物活性,以便下一步的實驗需要.
3)原核表達載體一般只能在原核生物中表達外源基因,但有些穿梭載體可以分別在真核和原核生物中表達它們的表達元件.
12樓：_寧韓飄雪
是載體的區別…一個是原核細胞裡得到的，一個是真核…
13樓：匿名使用者
載體指的是基因工程中的載體嗎?
載體構建時，如何區分質粒是真核表達還是原核表達，二者的啟動子分別有哪些？
14樓：山大煤老闆
這個做你就有點盲目了，我覺得你應該先確定你要原核表達，還是真和表達，確定後，在選擇質粒。正如你所說載體是可以構建的，所以質粒作為載體，其啟動子也是可以構建的，，現在實驗室往往自己構建所需要的載體進行表達，就是我需要什麼樣的質粒，我就構建什麼樣的質粒。
明白哇。質粒的啟動子不同之處在於原核和真核表達體系的不同，他們是特異針對不同的表達方式去構建的，有好多呢
15樓：匿名使用者
主要看啟動子吧,真核和原核啟動子的元件,很不同的.
原核: t7, sp6等;
真核: 35s等.
粗鹽提純的實驗現象，提純粗鹽的步驟和實驗現象，結論，解釋和化學方程式
如何把粗鹽變細鹽？實驗 告訴你 溶解 粗鹽固體為灰色，加入水中所得液體呈渾濁狀。過濾 濾液是無色透明液體，濾紙上的殘留物呈黑色。蒸發 隨著加熱，蒸發皿中液體的量減少 當蒸發到一定程度時，蒸發皿底部有固體析出。蒸發得到的固體為白色。關於化學中的粗鹽提純的實驗現象 總共有四步 溶解 過濾 蒸發 稱量 溶...
原核生物的表達系統和真核的有什麼不同
真核生物和原核生物的細胞結構和遺傳資訊存在明顯差異，在基因組結構上，原核生物結構簡單，資訊量少 真核生物結構複雜，資訊量大，在基因表達調控上，雖然二者可以在複製 擴增 基因啟用 轉錄 轉錄後 翻譯和翻譯後等多級水平上進行，但轉錄水平調控是主要的，如何實施調控，真核基因表達調控的環節。轉錄翻譯在同一場...
觀察蠶豆種子的結構的實驗步驟,某同學觀察種子結構的實驗步驟如五4觀察菜豆種子的結構取一粒菜豆種子，觀察它的外形剝去該
1 目的要求 1 觀察認識蠶豆種子和玉米種子的結構。2 材料用具 浸泡過的蠶豆種子和玉米種子 刀片 放大鏡 滴管 稀碘液。2 方法步驟 觀察蠶豆種子的外形和結構。1 取一粒浸軟的蠶豆種子，觀察它的外形以及種皮上的黑色眉狀的種臍和種孔。用手擠壓這顆種 子，水從 冒出來。2 剝掉種皮，觀察胚。首先看到的...