1樓：不藥博士
胰蛋白酶工作條件為37度，ph8.5的微鹼性環境，緩衝液使用25mm的碳酸氫銨即可，終濃度為0.01ug/ul
酶工程 郭勇 200
2樓：人┤├○╞亼
（1）酶工程的概念以及酶製劑的生產和應用的基礎知識（知道）。
（2）使學生了解酶工程發展的概況。
（3）一些酶工程與基因工程，細胞工程和發酵工程之間具有相互交叉滲透的關係（知道）。
2．態度觀念方面
（1）通過酶製劑在人們社會生活中的應用的學習，激發學生學習興趣，培養學生理論聯絡實際的科學態度。
（2）通過了解生物工程在世界經濟中的重要地位及未來發展前景，增強學生科技是第一生產力的認識。
3．能力方面
通過收集有關酶製劑在社會生活中的應用情況的資料、資訊，培養學生獲取資訊的能力。
重點、難點分析
1．重點：
（1）通過學習使學生了解酶製劑生產中，酶的產生、提取和分離純化，加工等生產過程及其簡單原理是本節教學的重點之一。
（2）通過討論引導學生了解酶工程與基因工程、細胞工程、發酵工程之間，具有相互交叉滲透的關係也是本節的教學重點內容。
2．難點：
（1）酶製劑生產中諸如酶的提取、固定化等原理，由於涉及到很多其他學科的知識，學生較難理解。因此，生產酶製劑的原理是本節的教學難點。
（2）酶製劑的應用中諸如尿糖試紙、酶感測器等的原理比較抽象，學生也很難理解，因此，酶製劑的應用及其原理也是教學難點。
教學模式
啟發講解與學生討論相結合。
教學手段
酶製劑的標本，投影片等。
設計思路
1．前期知識準備：
（1）酶的概念及特性。
（2）酶的種類：胞內酶、胞外酶、組成酶、誘導酶。
2．通過對酶在生活中應用例項的討論使學生了解酶工程的概念。
3．通過教師啟發講解使學生了解酶製劑的生產、提取和分離純化以及固定化酶的相關知識。
4．通過事例分析總結出社會生活中酶製劑的用途。
5．通過討論使學生了解生物工程各分支領域之間的關係。
6. 通過對生物工程未來的暢想使學生加深科學技術是第一生產力的認識。
3樓：匿名使用者
（1）總活力（total activity）的**率：是表示分離純化過程中酶的損失情況。
（2）比活力（specific activity）提高的倍數：比活力是指在特定的條件下，1mg酶蛋白所具有的酶活力單位數，其提高的倍數是表示分離純化方法的有效程度。
酶溶法利用酶反應，分解破壞細胞壁組分的特殊化學鍵，從而達到破碎細胞目的。
酶溶法可以分為外加酶法和自溶法兩種。
化學滲透法
某些化學試劑，如有機溶劑、變型劑、表面活性劑、抗生素、金屬螯合劑等，可以改變細胞壁或膜的通透性，從而使胞內物質有選擇的滲透出來，這種處理方法稱為化學滲透法。
什麼是飽和度?
溶液中飽和硫酸銨的體積與溶液總體積之比.
例如:在60ml的酶液中加入40ml的飽和硫酸銨溶液,則次鹽析液中硫酸銨的濃度為:
(40/(60+40))x 100%=40%
等電點法
定義：利用蛋白質在等電點時濃度最低以及 不同的蛋白質具有不同的等電點的特性，對蛋白質進行分離純化的方法。
酶的純化方法從原理上看可分為幾種型別：1，利用一種酶相對於其他酶溶解度不同的沉澱法；2，依據酶在兩相間分配作用不同的相分配法；3，利用酶對固體載體的吸附性質不同，通過拄層析方式將它們分別洗脫下來的拄層析法；4，依據酶在電場或離心場中運動速度不同的電泳法或離心法。上述提純方法的適當結合，在多數情況下，足以獲得純化的酶。
膜分離是利用一種特殊的具有選擇透過功能的薄層物質（稱為分離膜），使流體內的一種或幾種物質通過，而其他物質不能通過，從而起到濃縮和分離純化作用的技術。
膜分離技術一般分為反滲透、超濾、納濾、微濾，它們主要區別在於膜孔徑的大小。在酶的純化中常用的是超濾和微濾。
試驗液中的大分子不能穿過半透膜而被截留與膜內，可透析的小分子經擴散作用不斷透過半透膜而相互滲透，這種現象稱為透析。
透析袋孔徑大小可經機械作用或理化處理而改變。
線形膨脹可使孔徑減小至50％，而放射形膨脹作用由於管內液體靜壓力加大，可使管膜孔徑增加1~2倍以上。
某些小分子溶質的滲透性也因溶液中存在微量表面活性劑而增加,可能是由於它們吸附在膜的」活性位置」上,改變了膜的理化特性。
已成商品乾燥的透析袋在製備時曾用10％的甘油處理過,以防乾燥脆裂,並含有極其微量硫化物、重金屬和一些具有紫外吸收的雜質。50％乙醇處理對除去具有紫外吸收雜質特別有效。
超濾膜的效能指標：滲透通量和截流量
額定截留水平表示每中超濾膜所規定截留溶質分子質量的範圍。在這個範圍內，絕大多數溶質分被膜截留。截留分子質量愈大，膜的表關孔徑愈大，反之膜的表關孔徑愈小。
一般選用額定截留水平稍低於所分離、濃縮的溶質分子質量。
流率可用在一定壓力下每分鐘通過單位面積膜的液體量來表示(一般用無離子水進行測定)。實驗中常用ml/cm2/min表示流率單位。流率大小不僅和膜的表現空徑大小有關，而且和膜的結構有關。
影響流速的幾個因素
1）溶質的分子性質
2）溶質濃度
3）壓力
4）攪拌
5）溫度
6）其他
幹凝膠的用量（g）= ∏r*r*h/膨脹度（床體積/g）
可採用細長的層析柱，柱長：柱內徑=50：1或100：1
裝柱的方法分為幹裝法和溼裝法兩種
上樣量與測定方法和層析柱大小有關。如測定樣品含量的方法靈敏或床體積小時，加樣量可少，否則反之。
加樣量掌握得當，可提高分離效果。一般來說，加樣量越少，或加樣體積越小（樣品濃度高時），解析度越高。但是，當用於樣品的製備和脫鹽時，加樣量應在不影響解析度的前提下增大。
凝膠過濾的應用
（1）脫鹽
（2）用於分離提純
（3）測定高分子物質的相對分子質量
（4）高分子溶液的濃縮
作為離子交換劑應滿足以下條件:
1.有高度的不溶性
2.有疏鬆多孔的結構或巨大的表面積
3.有較多的交換集團
4.有穩定的物理化學性質
梯度的形成：
1、增加溶液的離子強度用一簡單的鹽（如nacl）溶於稀緩衝液中；
2、改變溶液的ph，若使用的是陽離子交換劑，ph應從低到高遞增；使用陰離子交換劑，則應從高到低遞減。（實際許可的ph範圍應由待分離物質的穩定ph範圍和離子交換劑限制的ph範圍來決定）
離子交換劑再生：使用過的離子交換劑恢復原來的性狀。（通過上述的酸鹼反覆處理即可，但有時也可藉助轉型處理來完成）
常用吸附介質
一.活性炭
二.矽膠
三.磷酸鈣
等電聚焦
等電聚焦是一種高解析度的蛋白質分離技術。它是利用蛋白質或其他兩性電介質物質具有不同的等電點，從而在一個穩定，連續，線形的ph梯度中得到分離。
酶結晶原理：酶作為一種生物大分子，分子量大，結構複雜，且不穩定和敏感，不易定向聚集。所以結晶條件苛刻，要維持在水合狀態，處於或接近生理ph及溫度的條件下結晶。
此外，確保酶的天然活性是至關重要的。只有當酶溶液處於過飽和狀態才有析出晶體的可能。我們一般採用重結晶的方法提高純度，得到更好的酶結晶。
酶結晶的要求
1.酶的純度
2.酶的濃度
3.結晶溫度
4.溶液的ph
5.離子強度
酶結晶的方法
1.鹽析法
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3.等電點法
4.金屬離子法
5.溫差法
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