提取血液的rna怎麼提取,提取血液的RNA怎麼提取

2021-12-19 19:13:22 字數 2399 閱讀 5457

1樓:北京索萊寶科技****

取新鮮的血液(紫管),加入3倍體積紅細胞裂解液,混勻後室溫放置10分鐘,10,000 rpm離心1分鐘。

徹底吸棄上清,收集白細胞沉澱。

每100-200μl血液收集的白細胞沉澱加入1ml trizol。室溫放置5min,使樣品充**解。

4℃12,000 rpm 離心10分鐘,取上清()。

每1ml trizol加入200μl氯仿,劇烈振盪混勻後室溫放置3-5 min,自然分相。

4℃ 12,000rpm離心10-15min。樣品會分成三層:黃色的有機相,中間層和無色的水相,rna主要在水相中,把水相轉移到新管中(小心吸取水相)

在上清中加入等體積冰冷的異丙醇(),室溫放置10-20min。

4℃ 12,000 rpm離心10min,棄上清,rna沉澱於管底。

rna沉澱中加入1ml 75%乙醇(用rnase-free水配製,),溫和振盪離心管,懸浮沉澱。

4℃5,000-8,000 rpm離心1-2min,棄上清。

室溫放置1-2分鐘晾乾沉澱。

沉澱中加入50-100μl rnase-free水,輕彈管壁,以充分溶解rna,-70℃儲存。

檢測純度和濃度(od260/od280在2.0左右)

如何提血液中rna

2樓:不會剔牙的貓

方法一:先用裂解液將血液中的細胞進行裂解,讓細胞中的rna釋放出來,然後用磁珠吸附,洗脫(目的是將吸附在磁珠上的蛋白質或其他大分子雜質洗去),最後用緩衝液將rna洗脫下來即可;方法二:用裂解液將血液中的細胞進行裂解,讓細胞中的rna釋放出來,用酒精進行沉澱,rna沉澱在管底,離心,棄去上清,將沉澱洗脫,(目的也是將吸附在磁珠上的蛋白質或其他大分子雜質洗去),最後用緩衝液將rna洗脫下來即可。

如何從血清中提取rna

3樓:北京索萊寶科技****

血液(全血,也就醫學上說的外周血)中rna的含量很低,1ml一般在3ug左右(1-7ug)。一般是處理抗凝血液。

像以上全血的rna提取有兩種思路:

1)直接處理抗凝的全血,即加入如trizol的裂解液直接往下做。此方法有個缺點:處理的體積血液體積有限,一般1ml trizol處理100ul血液,最多不超過200ul.

2) 先去除血液中的紅細胞分離出其中的白細胞(即淋巴細胞),然後提取白細胞的rna。此方法的缺點:只能提取得到淋巴細胞的rna,血液中游離的如病毒rna無法提得。

4樓:匿名使用者

現在我們做實驗大多不用繁瑣的手提方法了,biog cfdna easy kit可以用於提取血清中的rna

5樓:

我的實驗是從血清中提取microrna, 用過biog的,結果還可以。

提取rna的血液怎樣儲存

6樓:匿名使用者

在用血液標本進行基因表達研究時,需要及時把新鮮血液中有核細胞的rna提取出來。全血還不能直接放到-80℃儲存,即使在-80℃儲存,全血中的rna也容易發生降解。傳統的提取新鮮全血rna方法是把先把有核細胞從全血中分離出來,需要加白細胞分離液、離心等步驟,比較繁瑣,在臨床醫院往往難以實施。

作為rna提取的領先公司,北京艾德萊的研發人員在05年國內首家研發成功液體樣本rna提取試劑rn01 tripure ls(ls 意思是liquid sample。可以直接裂解全血提取rna,避免了先裂解白細胞可能導致的rna降解,也大大簡化了操作步驟。操作時間比普通方法節約至少三分之一。

在臨床上採血時,可以先把tri pure ls reagent分裝750ul到1.5ml的離心管中。血液樣本可以先抗凝處理(edta抗凝或者其他抗凝方式都可),然後取250ul全血樣品加入到750ul的tri pure ls reagent中,用移液槍反覆抽打併振盪混勻,在室溫裂解5min-10min,直至血細胞充分發生裂解。

然後可把此裂解液儲存在-20℃下可達2個月,-80℃可達半年。在此期間,可以把該裂解液運輸到北京艾德萊生物公司進行rna的抽提,運輸過程可以4℃ 1天,-20℃ 一週。

在全血rna提取試劑直接裂解全血的基礎上面,北京艾德萊又進一步簡化了操作,增加了離心柱操作,推出了rn23 rnaliquid 超速全血(液體樣本)總rna提取試劑盒。點此詳見。經過離心柱子吸附漂洗,除了進一步簡化了操作步驟外,更適合臨床高通量操作外, 還極大的提高了rna的純度。

除了一般常見的rt pcr 或者熒光定量pcr外,rna純度可以滿足最嚴格的實驗要求比如基因表達譜晶片要求, 1ml的全血可以得到10μg左右的total rna,足夠滿足晶片分析的需要

7樓:

最重要的是加rnase inhibitor。這個是為了防止rna被自然降解掉。

當然冷凍可以降低rnase的活性,所以刻意配合這種方式。

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