1樓：匿名使用者
1.wash buffer中加入無水乙醇後，終濃度差不多就是70%的乙醇溶液了，在沉澱的dna中，由於過多的鹽雜質存在，影響dna的酶切等反應，wash buffer就是洗去這些鹽雜質的。
2.用無水乙醇沉澱dna，這是實驗中最常用的沉澱dna的方法。乙醇的優點是可以任意比和水相混溶，乙醇與核酸不會起任何化學反應，對dna很安全，因此是理想的沉澱劑。
dna溶液是dna以水合狀態穩定存在，當加入乙醇時，乙醇會奪去dna周圍的水分子，使dna失水而易於聚合。一般實驗中，是加2倍體積的無水乙醇與dna相混合，其乙醇的最終含量佔67％左右。因而也可改用95％乙醇來替代無水乙醇（因為無水乙醇的**遠遠比95％乙醇昂貴）。
但是加95％的乙醇使總體積增大，而dna在溶液中有一定程度的溶解，因而dna損失也增大，尤其用多次乙醇沉澱時，就會影響收得率。折中的做法是初次沉澱dna時可用95％乙醇代替無水乙酵，最後的沉澱步驟要使用無水乙醇。也可以用0.
6倍體積的異丙醇選擇性沉澱dna。一般在室溫下放置15－30分鐘即可。如果你沒有加無水乙醇，核酸不能沉澱，都隨洗液棄掉了。
3.十二烷基硫酸鈉（sodium dodecylsulfate）遇到鉀離子後變成了十二烷基硫酸鉀（potassium dodecylsulfate, pds），鉀離子置換了sds中的鈉離子形成了不溶性的pds，而高濃度 的鹽，使得沉澱更完全。大家知道sds專門喜歡和蛋白質結合，平均兩個氨基酸上結合一個sds分子，鉀鈉離子置換所產生的大量沉澱自然就將絕大部分蛋白質 沉澱了，讓人高興的是大腸桿菌的基因組dna也一起被共沉澱了。
這個過程不難想象，因為基因組dna太長了，長長的dna自然容易被pds給共沉澱了，儘管sds並不與dna分子結合。
需要特別說明的是：醋酸的加入是為了中和naoh，因為長時間的鹼性條件會打斷dna，所以要中和之。基因組dna一旦發生斷裂，只要是50－100 kb大小的片斷，就沒有辦法再被pds共沉澱了。
所以鹼處理的時間要短，而且不得激烈振盪，不然最後得到的質粒上總會有大量的基因組dna混入。
2樓：淘歌
wash buffer其實是70%的無水乙醇，其目的是「wash」，也就是洗去柱子上殘餘的鹽分其他成分。
沒有加無水乙醇，那就悲劇了，柱子上的dna在這一步已經被洗的差不多了，都脫下了。做膠**的wash buffer應該是成分類似，但不同公司，或不同的柱芯，其成分可能有差異。
使用試劑盒提取質粒，分離基因組dna，其原理還是鹼裂解法的原理：當菌體在naoh和 sds溶液中裂解時，蛋白質與dna發生變性，當加入中和液後，質粒dna分子能夠迅速復性，呈溶解狀態，離心時留在上清中；蛋白質與染色體dna不變性 而呈絮狀，離心時可沉澱下來。
誰用過博凌科為的質控型高純度質粒小量快速提取試劑盒，儲存要注意什麼呀？我們儲存出了問題
3樓：手機使用者
儲存事項：
1、第一次使用時，將試劑盒所帶的全部rnase a加入溶液p1後（終濃度100ug/ml）置於2-8℃儲存。如果溶液p1中rnase a失活，提取的質粒可能會有微量rna殘留，在溶液p1中補加rnase a即可。
2、環境溫度低時溶液p2中sds可能會析出渾濁或者沉澱，可在37℃水浴加熱幾分鐘，即可恢復澄清，不要劇烈搖晃，以免形成過量的泡沫。
3、避免試劑長時間暴露於空氣中產生揮發、氧化、ph值變化，各溶液使用後應及時蓋緊蓋子。尤其100xbluelysis含有高濃度乙醇,更要及時封口膜封好,防止揮發。
博凌科為的產品和普通產品的區別在於配有bluelysis, 它是一種和質粒提取試劑盒配套使用的顏色指示劑。通過在溶液p1裡面加入bluelysis，可以直觀地通過顏色的改變監測質粒提取過程中菌體重懸是否充分、裂解是否均
一、中和沉澱是否完全，這樣可以避免一些常見操作問題（如因為裂解不充分或者中和沉澱不完全造成的產量降低，sds或者基因組dna殘留影響下游步驟等）。因此特別適合於經驗不太豐富初學者和希望確保每個操作正確並得到最大產量的富有經驗的研究人員。
質粒小量提取跟大量提取有什麼區別
4樓：之何勿思
區別：1、所需菌液不同。大提用於大量菌液的提取，100ml-500ml 均可，而小提用的菌液量很少，一般1.5-5ml。
2、純度不同。一般試劑盒中大提比小提多了溶菌酶、異丙醇（**沉澱核酸）、含一定量peg的氯化物（**質粒dna）及乙酸銨等，其作用及目的都是有利於細菌的裂解和質粒的純化，所以大提的產物比小提的量多很多，而且純度很高。
3、實驗要求不同。小提一般用於質粒鑑定和對純度要求不是很高的實驗，大提用於質粒的大量提取和轉染等純度要求很高的實驗。
5樓：
1、菌液量提取：大提用於大量菌液的提取，100ml-500ml 均可，而小提用的菌液量很少，一般1.5-5ml。
2、產物量：一般試劑盒中大提比小提多了溶菌酶、異丙醇（**沉澱核酸）、含一定量peg的氯化物（**質粒dna）及乙酸銨等，其作用及目的都是有利於細菌的裂解和質粒的純化，所以大提的產物比小提的量多很多，而且純度很高。
3、實驗要求條件：大提用於質粒的大量提取和轉染等純度要求很高的實驗,小提一般用於質粒鑑定和對純度要求不是很高的實驗。
實驗原理：提取質粒dna的方法有很多種，從提取產量上分可分為微量提取、中量提取、大量提取，從使用儀器上分可分為一般提取和試劑盒方法提取，從具體操作方法分可以分為鹼裂解法、煮沸法、牙籤法等，各種不同的方法各有其優缺點，根據不同的實驗目的可以採用合適的提取方法。
6樓：寶蓋喬喬
大提質粒和小提質粒的基本原理是一樣的，都是通過一定的方法（如加鹼裂解）使在細菌內大量擴增的質粒釋放出來，然後經過去蛋白去rna等一系列步驟純化dna，最終將dna提取出來。區別：
1.大提用於大量菌液的提取，100ml-500ml 均可，而小提用的菌液量很少，一般1.5-5ml。
2.一般試劑盒中大提比小提多了溶菌酶、異丙醇（**沉澱核酸）、含一定量peg的氯化物（**質粒dna）及乙酸銨等，其作用及目的都是有利於細菌的裂解和質粒的純化，所以大提的產物比小提的量多很多，而且純度很高。
3.小提一般用於質粒鑑定和對純度要求不是很高的實驗，大提用於質粒的大量提取和轉染等純度要求很高的實驗。
博凌科為 高純質粒小量製備試劑盒試用注意事項？及工作原理是怎樣的？用過的介紹一下
7樓：
博凌科為 高純質粒小量製備試劑盒
原理簡介：
本試劑盒採用改進sds-鹼裂解法裂解細胞，離心吸附柱內的矽基質膜在高鹽，低ph值狀態下選擇性地結合溶液中的質粒dna，再通過去蛋白液和漂洗液將雜質和其它細菌成分去除，最後低鹽，高ph值的洗脫緩衝液將純淨質粒dna從矽基質膜上洗脫。
注意事項：
◆ 第一次使用時，將試劑盒所帶全部的rnase a加入溶液p1後（終濃度100ug/ml）置於4℃儲存。如果溶液p1中rnase a失活，提取的質粒可能會有混雜有微量rna殘留， 這時可在溶液p1中補加rnase a即可。
◆ 第一次使用前請先在15ml漂洗液wb中加入45ml無水乙醇，加入後請及時在方框打鉤標記已加入乙醇，以免多次加入!
◆ 溫度低時溶液p2中sds可能會出現渾濁或者析出沉澱，可在37℃水浴加熱幾分鐘，即可恢復澄清，不要劇烈搖晃，以免形成過量的泡沫。
◆ 避免試劑長時間暴露於空氣中產生揮發、氧化、ph值變化，各溶液使用後應及時蓋緊蓋子。
試劑盒特點：
◆ 產量高---一次提取高達30ug以上的質粒。
◆ 純度高---od260/od280一般為1.80~1.85本試劑盒提取的質粒純度好，能充分保證測序所需要的讀長(用於abi3730測序一般可達1000bp有效讀長)。
◆ 快速，方便，不需要使用有毒的苯酚，氯仿等試劑，也不需要乙醇沉澱。
提示bioteke的質粒提取試劑盒既適用於革蘭氏陰性菌中質粒的提取，同時也可從革蘭氏陽性菌中提取質粒。由於革蘭氏陽性菌外被一層較厚的細胞壁，會嚴重阻礙細菌細胞的裂解，因此必須在裂解細胞前破除，方法如下：
收集適量的菌體，加入250ul溶液p2，充分懸浮菌液，加入溶菌酶使其終濃度在10-20mg/ml左右在37℃處理30分鐘左右。加入溶菌酶的濃度和處理的時間可根據不同的菌主和具體實驗條件進行調整。
質粒dna的小量提取時dna的量太少是為啥
8樓：匿名使用者
大提質粒和小提質粒的基本原理是一樣的，都是通過一定的方法（如加鹼裂解）使在細菌內大量擴增的質粒釋放出來，然後經過去蛋白去rna等一系列步驟純化dna，最終將dna提取出來。區別：
1.大提用於大量菌液的提取，100ml-500ml 均可，而小提用的菌液量很少，一般1.5-5ml。
2.一般試劑盒中大提比小提多了溶菌酶、異丙醇（**沉澱核酸）、含一定量peg的氯化物（**質粒dna）及乙酸銨等，其作用及目的都是有利於細菌的裂解和質粒的純化，所以大提的產物比小提的量多很多，而且純度很高。
3.小提一般用於質粒鑑定和對純度要求不是很高的實驗，大提用於質粒的大量提取和轉染等純度要求很高的實驗。
質粒小量提取試劑盒能提取多大的質粒
9樓：匿名使用者
大提質粒和小提質粒的基本原理是一樣的，都是通過一定的方法（如加鹼裂解）使在細菌內大量擴增的質粒釋放出來，然後經過去蛋白去rna等一系列步驟純化dna，最終將dna提取出來。區別：
1.大提用於大量菌液的提取，100ml-500ml 均可，而小提用的菌液量很少，一般1.5-5ml。
2.一般試劑盒中大提比小提多了溶菌酶、異丙醇（**沉澱核酸）、含一定量peg的氯化物（**質粒dna）及乙酸銨等，其作用及目的都是有利於細菌的裂解和質粒的純化，所以大提的產物比小提的量多很多，而且純度很高。
3.小提一般用於質粒鑑定和對純度要求不是很高的實驗，大提用於質粒的大量提取和轉染等純度要求很高的實驗。
質粒在基因工程中的作用是什麼質粒DNA在基因工程中的作用
質粒在基因工程中是一類重要的載體，其作用主要是攜帶一些基因片段 可以是編碼基因，也可以是調控區等 在細胞內環境中進行表達或參與通路的相互作用，達 們希望的目的，這些目的一般包括 取得蛋白產物 有直接提取的，也有表達酶進行藥物合成的 基因相互作用關係 比如過表達某一特定基因觀察表型變化 總之質粒的作用...
「親子鑑定」需要從血液中提取DNA，那麼DNA來自於血液成分的A紅細胞B白細胞C血小板D
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ctab法提取dna步驟及其藥品作用
1 取材料，加液氮研磨成粉末狀，迅速移入1.5 ml eppendorf管中 2 加入800 l的ctab提取緩衝液，混勻 ctab在65 水浴預熱 每5min輕輕 幾次，20min後12000 r min，離心15 min 3 小心吸取上清液，加入等體積的酚 氯仿 各400 l 溶液，混勻，4 1...