1樓:龐驍蕾
1)取材料,加液氮研磨成粉末狀,迅速移入1.5 ml eppendorf管中;
(2)加入800 μl的ctab提取緩衝液,混勻(ctab在65℃水浴預熱),每5min輕輕**幾次,20min後12000 r/min,離心15 min;
(3)小心吸取上清液,加入等體積的酚:氯仿(各400μl)溶液,混勻,4℃,12000 r/min,離心10 min;
(4)小心吸取上清液,加入等體積的氯仿,混勻,4℃,12000 r/min,離心10 min。
(5)重複步驟(4)1-2次,以蛋白層不出現為止;
(6)取上清,-20℃沉澱1h,4℃,12000 r/min,離心10 min;
(7)棄去上清液,用70%乙醇洗滌沉澱2次;
(8)室溫下乾燥後(一般乾燥5-15 min),溶於30-50 μl depc去離子水中,於-20℃或者-70℃下儲存備用。
dna提取過程中各試劑的作用?
2樓:匿名使用者
注意:去汙劑不是用來裂解細胞的,裂解細胞一般用液氮
去汙劑用來提高純度,除去雜質的
ctab在dna提取中起到哪些作用
3樓:淵源
ctab (十六烷基三乙基溴化銨)
是一種去汙劑,可溶解細胞膜,它能與核酸形成複合物,在高鹽溶液中((0.7 mol/l nacl)是可溶的,當降低溶液鹽濃度到一定程度(0.3 mol/l nacl)時,從溶液中沉澱,通過離心就可將ctab-核酸的複合物與蛋白、多糖類物質分開。
最後通過乙醇或異丙醇沉澱dna,而ctab溶於乙醇或異丙醇而除去。
ctab法提取dna的原理是??
4樓:士誠小人也
ctab是一種陽離子去汙劑,可以有助於細胞裂解並具有從低離子強度溶液中沉澱核酸與酸性多聚糖的特性。在高離子強度的溶液中(>0.7mol/l nacl),由於溶解度差異,ctab與多糖形成複合物沉澱,但核酸仍可溶。
通過有機溶劑抽提,去除蛋白,酚類等雜質後加入乙醇沉澱即可使核酸分離出來。
5樓:風景是否還在
ctab法原理 ctab(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化銨),是一種陽離子去汙劑,具有從低離子強度溶液中沉澱核酸與酸性多聚糖的特性。在高離子強度的溶液中(>0.7mol/l nacl),ctab與蛋白質和多聚糖形成複合物,只是不能沉澱核酸。
通過有機溶劑抽提,去除蛋白,多糖,酚類等雜質後加入乙醇沉澱即可使核酸分離出來。
ctab 法提取dna的原理和步驟?
6樓:愛上方頭獅女孩
1)取材料,加液氮研磨成粉末狀,迅速移入1.5 ml eppendorf管中;
(2)加入800 μl的ctab提取緩衝液,混勻(ctab在65℃水浴預熱),每5min輕輕**幾次,20min後12000 r/min,離心15 min;
(3)小心吸取上清液,加入等體積的酚:氯仿(各400μl)溶液,混勻,4℃,12000 r/min,離心10 min;
(4)小心吸取上清液,加入等體積的氯仿,混勻,4℃,12000 r/min,離心10 min。
(5)重複步驟(4)1-2次,以蛋白層不出現為止;
(6)取上清,-20℃沉澱1h,4℃,12000 r/min,離心10 min;
(7)棄去上清液,用70%乙醇洗滌沉澱2次;
(8)室溫下乾燥後(一般乾燥5-15 min),溶於30-50 μl depc去離子水中,於-20℃或者-70℃下儲存備用。
7樓:匿名使用者
這個所謂的「滿意答案」是無法提出dna的,第7步水相中的dna被扔了,建議不要嘗試。
8樓:單曲迴圈
如果按照這個方法能提出來dna,我就真的服了。
9樓:
一樓所說步驟有省略,不可輕信,僅供參考而矣。
ctab法提取dna時,最後一步溶於ddh2o時,要不要用槍吹打啊,還是放著自行
dna提取主要是ctab方法,其他的方法還有物理方式如玻璃珠法 超聲波法 研磨法 凍融法。化學方式如異硫氰酸胍法 鹼裂解法。生物方式 酶法。根據核酸分離純化方式的不同有 矽質材料 陰離子交換樹脂等。提取dna總的原則 1.保證核酸一級結構的完整性 2.核酸樣品中不應存在對酶有抑制作用的有機溶劑和過高...
「親子鑑定」需要從血液中提取DNA,那麼DNA來自於血液成分的A紅細胞B白細胞C血小板D
血液由血漿和血細胞兩部分組成,血漿呈淡黃色,半透明,血漿中含有大量的水,還含有蛋白質 葡萄糖 無機鹽等,血漿的主要功能是運載血細胞,運輸養料和廢物 血細胞包括紅細胞 白細胞 血小板 紅細胞無細胞核,呈兩面凹的圓餅狀 白細胞有多種,有細胞核,比紅細胞大,數量少 比紅細胞和白細胞都小得多,形狀不規則,沒...
biospin質粒DNA小量提取試劑盒
1.wash buffer中加入無水乙醇後,終濃度差不多就是70 的乙醇溶液了,在沉澱的dna中,由於過多的鹽雜質存在,影響dna的酶切等反應,wash buffer就是洗去這些鹽雜質的。2.用無水乙醇沉澱dna,這是實驗中最常用的沉澱dna的方法。乙醇的優點是可以任意比和水相混溶,乙醇與核酸不會起...