1樓：
包被抗原後加入待測抗體，反應後洗板，加入酶標二抗，反應後再洗板，加入底物顯色。
間接elisa方法主要用來檢測抗體，例如我們對動物進行免疫後要檢測抗血清的效價的話，就可以用間接elisa方法來測。
2樓：鬱悶的太陽
酶聯免疫吸附實驗(elisa) 即將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，
版使酶標記的抗原抗體反應權在固相表面進行的技術。該技術可用於檢測大分子抗原和特異性抗體等，具有快速、靈敏、簡便、載體易於標準化等優點。
做elisa實驗需要注意一些什麼？
3樓：南京金益柏生物科技****
elisa實驗中應該注意的問題,包括樣品稀釋、試劑盒平衡、樣品和試劑的混勻、加樣、溫育等問題,希望對你有用處.
elisa試劑盒有著準確性高、靈敏度高、特異性強的諸多優點,深受廣大使用者朋友的喜愛.然而,在實驗過程中,也需要注意很多問題.對此,武漢福來生物工程提醒你,需要遵守一些規則,才能更好地進行實驗,取得較好的實驗成果.
elisa方法被廣泛應用於各種抗原和抗體測定.在elisa測定中影響因素較多,在檢測過程中除正常反應外,有時常見到一些錯誤的結果.引起elisa測定錯誤結果的原因主要有：
標本因素；試劑因素；操作因素.
1．樣品稀釋
一般產品的樣品稀釋倍數均通過大量試驗確定,以保證試驗的靈敏度和特異性.酶聯免疫反應是一種敏感性很高的反應,如果血清不稀釋,不可避免會產生很強的非特異性反應,出現假陽性.
2．試劑盒平衡
elisa中所有試劑和板條均應在試驗前平衡至室溫(約25℃),一般需在室溫放置20～30分鐘以上.平衡時間太短會造成試劑混勻不夠,樣品孵育時間相對縮短,elisa反應不夠充分.冬季室溫低,可將試劑盒置37℃溫箱20分鐘.
3．樣品和試劑的混勻
在稀釋前、後的樣品必須充分混勻,所有試劑在加樣前也須搖勻,以保證試驗的均一性.
4．加樣
加樣是一項很重要的步驟.加樣不可太快,要避免加在孔壁上部,不可濺出和產生氣泡.加樣太快,無法保證微量加樣的準確性和均一性.加在孔壁上部的非包被區,易導致非特異吸附.
5．溫育
溫育是elisa測定中影響測定成敗最為關鍵的一個因素.elisa作為一種固相免疫測定,抗原抗體的結合反應在固相上進行,要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原完全結合,必須在一定的溫度條件下反應一定的時間.
6．洗板
固相免疫測定技術是一種非均相免疫測定技術,需以洗滌操作將特異結合於固相的抗原或抗體與反應溫育過程中吸附的非特異成份分離開來,以保證elisa測定的特異性.洗液儘量不要溢位孔外；加洗液後要靜置1分鐘,甩去板孔中洗液後,一定要大力拍幹；及時更換吸水紙,尤其是拍過酶標記物的吸水紙一定要棄去,否則可能影響試驗結果.
7．顯色
顯色一定要控制時間,根據試劑盒說明操作即可.一般來說,顯色時間過短,結果偏低；顯色時間過長,空白增高或者非特異性顯色增加.
8．比色
比色要注意波長的選擇.以tmb為底物和以opd為底物的試劑盒均有使用,而前者比色波長為450nm,後者為492nm,濾光片需根據要求隨時更換.因此,容易出現濾光片錯用的問題.
4樓：萊特資訊科技****
1 臨床標本的收集和儲存
用於elisa測定的臨床標本最為常用的是血清（漿）。本實驗室用elisa測定乙肝兩對半，甲肝，戊肝，抗hiv的標本時，在處理和儲存方面要考慮以下幾個方面： 1） 要注意避免出現嚴重溶血及血清中混有紅細胞。
當標本出現嚴重溶血及血清中混有紅細胞時，反應孔不易洗淨，殘留在反應孔內的血紅蛋白具有過氧化物酶的活性，顯色時可能造成假陽性。 2） 標本凝固不全強行離心，造成血清中含有少量的纖維蛋白原，在實驗過程中形成纖維蛋白吸附在反應孔孔壁上不易洗掉，易造成假性結果。 3） 血清標本可在2～8℃下儲存1周。
如血清樣本需長時間儲存，則需放入-20℃冰櫃內冰凍儲存。冰凍儲存的血清標本須注意避免反覆凍融，標本可能引起假陰性結果。此外凍融標本的混勻不要進行劇烈振盪，應反覆顛倒混勻。
2 elisa 測定中試劑準備
在實驗開始前，將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20分鐘以上後，再 進行測定，證試劑盒溫度要和室溫一致。如果把試劑盒從冰箱拿出來直接做實驗會造成一些弱陽性標本的檢測出現假陰性。因為在後面的孵育反應步驟中，造成孵育時間不夠。
其次，elisa實驗中洗板用的洗液需每日更換配製，稀釋時所用的蒸餾水或去離子水應保證質量。
3 加血清樣本及反應試劑
血清樣本使用微量加樣槍加樣。使用微量加樣槍加樣必須注意避免以下幾點： 1） 加樣太快，無法保證微量加樣的準確性和均一性。
需勻速加樣，吸樣時，加樣槍需按到第一檔，加樣時，加樣槍需直接按到底。 2） 加樣應直接加入反應孔底部，加在反應孔孔壁上易濺出會對鄰近孔產生汙染。儘量避免出現氣泡。
3） 反應試劑的加入時先要注意試劑的有效期，再注意滴加的角度和滴加的速度。滴加太快易出現重複滴加或加在兩孔之間.
4 溫育的時間與溫度
溫育是elisa測定中最容易出現問題的步驟。溫育溫度應在37℃，水浴。溫育時間應按照試劑說明書上的時間嚴格執行。
溫育實際測定操作中要注意以下幾點： 1）要保證在設定的溫度下有足夠的反應時間。溫育時間不夠，弱陽性樣本測不出來 。
2）因為採用水浴，所以在溫育時一定要封板，防止水蒸氣形成水滴掉入反應孔內造成汙染，並有可能整板花板。
5 elisa測定的洗板
全自動洗板機的使用應注意以下幾點： 1） 洗板前，應檢查洗液瓶、蒸餾水瓶是否充足，廢液瓶是否滿瓶。2） 在自檢過程中注意觀察洗液灌注是否通暢，排液是否通暢。
3） 在洗板過程中，應注意觀察反應孔每孔是否灌滿且無外溢，每孔吸水是否吸盡，並且要保證洗液在孔中放置的時間。
6 elisa測定以tmb為底物的顯色
加入底物開始顯色反應前，最好是先檢查一下底物溶液的有效期。滴入a、b顯色劑後，需溫育15min，最後加入終止液終止反應，振盪混勻後即可進行下面的比色測定判斷結果。在此過程中應注意不要把顯色劑和終止液滴入順序弄反，否則重做實驗。
7 elisa的比色測定
elisa的比色測定由酶標儀進行測定，故需強調比色測定時，一定要注意酶標儀的波長是否是雙波長（450nm和630nm）。
8 elisa測定結果判定
結果判定一般是根據比色結果和肉眼觀察綜合判定。如在判定過程發現有些反應孔出現倒陰不陽的現象或出現不常見的模式（如乙肝兩對半中出現12陽性等），需本著嚴謹的態度，重新複查。
對elisa測定中出現問題的可能原因（非試劑盒本身的原因），總結如下： 1)弱陽性質控樣本檢測不出溫育的時間或溫度不夠；顯色反應時間太短；所用配製緩衝液的蒸餾水有問題。
2）測定的重複性差 ，這是由於測定操作引起的問題，包括 ①加樣本及試劑量不準；孔間不一致 ②加樣過快，孔間發生汙染 ③加錯樣本 ④加樣本及試劑時，加在孔壁 ⑤不同批號試劑盒中組分混用 ⑥溫育時間、洗板、顯色時間不一致 ⑦孔內汙染雜物，血清標本未完全凝固即加入，反應孔內出現纖維蛋白凝固或殘留血細胞，易出現假陽性等。 3）全部孔都不顯色 ① 漏加酶結合物； ② 洗板液配製中出現問題 ③ 漏加顯色劑a或b ④ 終止劑當顯色劑使用 4）全部板孔均有顯色 ① 板不乾淨 ② 顯色液變質 ③ 洗板液受酶等汙染
5樓：青島菲優特
elisa是酶聯接免疫吸附劑測定( enzyme-linked immunosorbnent assay )的簡稱。elisa可用於測定抗原，也可用於測定抗體。
原理：將已知的抗體或抗原結合在某種固相載體（常用聚苯乙烯，對蛋白質有較強物理吸附效能，且不影響抗體和抗原的免疫活性）上，並保持其免疫活性。測定時，將待測樣和酶標抗原或抗體按不同步驟與固相載體表面吸附的抗體或抗原發生反應，洗滌分離抗原抗體複合物和遊離成分；最後加入酶的作用底物催化顯色，進行定性或定量測定。
由於酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結果，使測定方法具有很高敏感度。
樣品不立即使用時，應將其分成數管-20℃或-80 ℃儲存，避免反覆冷凍。因elisa實驗只能檢測可溶性蛋白質的含量，因此要求樣本應清晰透明並離心除去沉澱物或懸浮物質。為確保實驗的準確性，-20℃或-80℃儲存的樣本應在1-6個月內完成檢測，4℃儲存的樣本在一週內完成檢測。
6樓：elva陳晶晶
1、要保證移液槍的準確性，誤差不能超過2%。可用水和電子天平進行確定。
2、吸取不同的液體後，要更換槍頭。即使是吸取標準品時。
3、要在實驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出，使各種試劑都恢復到室溫，以使結果更穩定。
4、實驗時，要使底物避光儲存。
5、用槍吸取液體時速度不能太快，以免產生氣泡而使吸取量不準確。
6、吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。
7、將液體加到酶標孔中時，避免槍頭和孔內液體接觸。
8、溫浴時，要用不乾膠或膠帶紙封好酶標板，防止水分的蒸發。
9、洗板時，每次洗液加入後，應靜置1分鐘，使清洗更加徹底。
10、底物是光敏感的，要在臨用前現配。
11、檢測前，要開啟酶標儀，使之穩定10分鐘以上。
12、待檢樣品要澄清，否則會影響結果。
13、溫浴時間應遵守試劑盒規定。
14、應儘量做雙孔實驗，這樣才能保證資料的準確性。
15、對結果有疑問的樣品要用其它方法進行確證。
請問我的elisa預實驗該怎麼實施？ 5
7樓：z女郎1號
1. 確定有進行elisa實驗最重要的儀器：
酶標儀；
2. 確定實驗動物種屬和elisa檢測指標：
查詢文獻，根據臨床意義，確定要用的實驗動物種屬（如大鼠、小鼠、豚鼠、兔、豬、狗等）和用elisa方法檢測的實驗指標（如白介素，生長因子，激素等）；
3. 確定要蒐集的標本型別：
如血清、抗凝血漿、肺泡灌洗液、腦脊液、尿液、關節華液、組織勻漿、細胞培養上清液等；
4. 確定要收集的標本數量：
用以確認需要採購檢測試劑盒的數量；
5. 確定標本的處理方法：
根據所採購的檢測試劑盒說明書，確定不同型別標本的正確處理方法；
6. 確定要收集的標本體積；
合理分組，根據實驗模型，確定要收集的標本體積；
7. 確定購買試劑盒的廠家和試劑盒類別：
根據適用於要檢測的標本的相應規格的elisa試劑盒的靈敏度、檢測範圍、**和到貨期等情況來確定檢測試劑盒的品牌廠家和類別；
8. 確定要購買的試劑盒的規格和數量：
根據標本數量，確定要購買的試劑盒的規格和數量，同時瞭解試劑盒的整盒有效期和拆開包裝後的有效期（各主要成分的開瓶有效期），降低實驗風險；
9. 確認實驗復孔：
為了增加結果的可靠性，對標準曲線和標本，要求做雙復孔或者三複孔，就是同一份標本，平行做兩次或者三次。如果本身試劑盒的穩定性好，而又不要求每個資料的絕對準確，主要目的是為了統計學意義的話，可以選擇做雙復孔或者是單孔。
10. 確定時間的合理安排：
最主要確定標本的採集時間，根據採集時間來安排標本的儲存條件、何時進行試劑盒的購買、如何進行預實驗的安排、如何進行大批量標本的檢測：如果標本採集時間過長，如超過六個月，請把標本放在-70度或者液氮罐中儲存；在基本上收集完標本的前一個月，進行試劑訂購。一般國外試劑的到貨期最長一個月，有足夠的時間來等待試劑盒的來到。
到貨後，取幾個樣品（最少兩個，估計的低值和高值）和標準品來進行預實驗。預實驗成功後才能進行大批量標本的實驗。
注：因為每個試劑盒可能都經過長途運輸，運輸途中可能會導致試劑盒失效，所以預實驗是必不可少的，這樣才能保證試劑盒沒有問題，而且一旦有問題可以快速得到解決，且不用浪費自己辛苦收集的標本。
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