1樓：手機使用者
可以使用已知濃度的某蛋白溶液，在elisa用的空白聚苯乙烯板上進行包被。包被結束後測定孔內溶液的蛋白濃度，包被前孔內蛋白量減去包被後的蛋白量就是吸附在酶標板上的蛋白量。這樣就可以知道酶標板的吸附性。
酶標板的蛋白質吸附性怎麼測是用elisa嗎
2樓：匿名使用者
elisa檢測系統可謂是免疫學反應應用到科研生產中最為廣泛最為靈敏的技術手段。可是在新老手操作過程中總是會出現或大或小的問題，本人在剛開始做elisa時就面臨很多困難，雖然有師兄師姐鋪路，但還是常常做得一塌糊塗，比如說花板，假陽性，全顯色，全部顯色，顯色比空白還低。。。。。。自己也為此苦惱過很長一段時間，隨著自己技術水平得提高，或多或少地也掌握了elisa體系的脾氣，也是熟能生巧吧，現在做方陣，做elisa已是輕車熟路了，以前檢測一種抗體用整整一下午還算得暈暈的，現在給我十個八個的從包被到顯色，一個工作日基本搞定。
下面就由我拋磚引玉地來說一下，做elisa的經驗總結:
1、包被原的性質很重要，蛋白濃度，是否降解，這關係到你做出的抗體可不可以被其識別，所以儲存抗原很重要，我做重組蛋白時，師兄都嚴格警告我一定要在冰浴下緩慢融化就是這個道理。還有有的包被原可能不是蛋白，對於生物素和脂類物質或小分子物質我們要事先對其改造再加以包被，我把方法簡要的列出如下:
①親和素生物素:先親和素先包被載體，加入生物素化的dna，這種包被方法均勻、牢固，已擴大應用於各種抗原物質的定量測定。
②脂類物質:可將其在有機溶劑（例如乙醇）中溶解後加入elisa板孔中，開蓋置冰箱過夜或冷風吹乾，待酒精揮發後，讓脂質自然幹固在固相表面。
③小分子必須依靠和大的蛋白載體偶聯後才能固定在固相載體上。
2、包被液的選擇，一般選擇ph9.6的碳酸鹽緩衝液。但有時由於試驗的需要，包被原的特殊性也可能採用中性的緩衝溶液來包。
應注意以下原理：由於蛋白質與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結合的，靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用，這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響，大分子蛋白質較小分子蛋白質通常含有更多的疏水基團，故更易吸附到固相載體表面。具體的試驗還要有堅固的理論外也要實踐，看一下最終可不可以應用到自己試驗當中去。
常用的包被液除了剛才提到的ph9.6碳酸鹽緩衝液，還有ph7.2的磷酸鹽緩衝液和ph7-8的tris-hcl緩衝液等等。
3、封閉：繼包被之後用高濃度的無關蛋白質溶液再包被的過程。封閉就是讓大量不相關的蛋白質充填這些空隙，從而排斥elisa後的步驟中干擾物質的再吸附。
常用封閉劑有：0.05%-0.
5%的bsa；10%的小牛血清或1%明膠；脫脂奶粉，比較價廉，可以高濃度使用（5%－10％）；還有一些稀有用到的各種動物血清（主要為了排除相似蛋白乾擾）和酪蛋白等等。但最終選用什麼，要依據試驗具體來實踐。
4、洗滌板：可以說在elisa操作中，洗滌是最主要的關鍵技術。因為聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的，為達到分離遊離的和結合的酶標記物的目的，清除殘留在板孔中游離的物質，以及非特異性地吸附的干擾物質，在洗滌時又應把這種非特異性吸附的干擾物質洗滌下來。
所以在洗板時會有一定誤差，人為因素很大（當然有條件的用洗板機除外），洗的不徹底或串了孔，對如此靈敏的elisa系統可是不小的影響。
5、加抗體標本(和二抗):注意該換槍頭時換槍頭。標本稀釋一般可用pbs稀釋，也可用封閉液去稀釋。如需加二抗，還要注意二抗的工作濃度，太高浪費，太低則著色淺。
6、顯色:顯色系統又很多，我們一開始做的時候，要選擇適宜的顯色系統。注意顯色系統酶活性底物的儲存hrp結合物加硫柳泵，ap結合物可加疊氮鈉。
7、每次做盡量要把陰陽空三個對照做好，如出現問題也好分析。
elisa板是用什麼材料做成的
3樓：哈靈生物試劑盒
市面上可bai以見到的有f、c、u、v四種底du部，由zhi於大多數elisa是從底部觀測dao，f和c底的專觀測面積較大，比較常用屬。
高吸附酶標板，蛋白吸附量較大（抗體用量也最省），但是非特異性吸附也會相應提高，檢測背景較高；
中吸附，蛋白吸附量較小，但是非特異性吸附也小，檢測背景較低；
低吸附，主要適用於時間分辨熒光檢測這類對背景有較高要求的；
氨基或其他特殊表面，適用於食品安全小分子間接競爭法。
酯酶是什麼酶？酯酶水解蛋白質嗎？
脂酶，是一種催化脂類的酯鍵水解反應的水溶性酶。1 因此，脂酶是酯酶下的一個亞類。脂酶存在於基本上所有的生物體中，它在對脂類 如甘油三酸酯 脂肪 油等 的消化 運輸和剪下中發揮著關鍵作用。編碼脂酶的基因甚至也存在於某些病毒中。功能。大多數脂酶作用於脂類分子的甘油骨架的特定位置。例如，人類胰臟脂酶 hu...
所有激素都是蛋白質嗎所以酶都是蛋白質嗎
肯定不是啊,激素有類固醇激素 甾體激素 如腎上腺皮質激 素,回性激素等。多肽答及蛋白質激素類,如垂體前葉激素,胰島素等,由氨基酸組成。胺類激素,如腎上腺素等,去甲腎上腺素等,其分子量小,結構簡單。脂肪酸衍生物,如前列腺素,其分子結構為不飽和脂肪酸。而大多數酶為蛋白質,但很多蛋白質中是含有s 金屬元素...
高中階段酶是蛋白質與RNA的問題
高中階段，對於酶的生物學本質如果絕對的描述為蛋白質那麼這種答案是不能認可的，因為rna性質的酶同樣存在。其實不光是生物學，任何事物都不能絕對的說，畢竟現有的結論都是對之前研究結果的總結，沒有誰可以保證以後的研究會產生什麼結果。面對選擇或者判斷說 酶都是蛋白質 你應該否定它。錯，限制性內切酶就是在基因...