1樓:佰草集
不知道bai
你沒雜出條帶du是因為什麼原因,還有
zhi你雜交的抗體是dao目的蛋白的抗體嗎回?你雜雜標籤蛋白試試答,看看有沒有條帶啊?我這麼說是因為,膜蛋白確實不好提取,而且提取後可能空間構想改變了,你的抗體可能識別不了了,而標籤蛋白是多肽,構象不會受影響,只要不被你的目的蛋白檔上就行,所以你可以用標籤蛋白的抗體雜交下,試試。
一般最好把標籤和目的蛋白融合表達一下
2樓:k紅蓮騎士
你好,我現在也遇到同樣的問題。請問你的問題最後是怎麼解決的?
質粒轉染細胞後,不表達的原因有哪些
3樓:匿名使用者
首先要確定是否已成功轉染,可以用帶熒光的載體進行核實,如觀察到熒光,這說明轉染成功;
其次要核實載體本身在轉染前是否存在問題,之前我們也遇到過類似情況,借的別人的載體,實際載體本身有問題,當然無法表達;
最後,要考慮轉染試劑的問題,如是否過期,是否能正常工作等。
4樓:愛瘋煙火的男孩
沒有與宿主細胞的染色體整合,目的基因被破壞
質粒轉染細胞為什麼不表達,求助
5樓:義翹神州加油
原因有很多可能:
質粒上的目的基因被宿主系統破壞;版
目的基因對應蛋白對細胞有毒害權作用,被細胞反饋調節到抑制表達;
目的基因表達與細胞本身特點能力不符;
質粒載體選擇與表達系統不合適;
檢測方法有問題,有表達,但是沒有檢測出來;......
6樓:牧銳衡同方
博凌科為解答:copy個人感覺bai不能憑沒有條帶就斷du定細胞沒有表達蛋
白,因為zhi跨膜蛋白本身就dao
是比較難提取的蛋白,再加上你的抗體不一定起作用,這些都要考慮進去的吧。建議先檢測或細胞有沒有表達你要的蛋白,就在轉染後48h加入一抗(適用於facs那種的抗體),然後再加入帶熒游標記的二抗;如果你能買到直接帶熒游標記的一抗也非常好。先檢測活細胞是否表達了你的蛋白。
然後再做決定。
一般轉染多長時間後檢測細胞的變化
7樓:阿魯巴星人
轉染的質粒和promoter不同,細胞表達的時間也不盡相同。
一般在24-48小時之間。你第一次做的話,就勤快點常觀察。
轉染6孔板後,怎麼收集我的細胞,然後提蛋白
8樓:匿名使用者
轉染6孔板後,一般長到十的六次方級別就可以提蛋白了
可以用移液器將細胞吸出來並高速離心,沉澱重懸於pbs中洗滌,接著就可以裂解提取蛋白了。可以用超聲,酶解等等,裂解後離心收集上清。
質粒轉染細胞多長時間提取蛋白
9樓:義翹神州加油
需要根據具體情況進行具體分析,推薦從以下角度進行分析:
對細胞表達目的蛋白的時間進行梯度設計,分別取樣然後做sds-page\wb分析;
參考實驗室經驗資料;
嘗試採用磁珠ip試劑盒產品(義翹有相關產品)進行小量樣品的快速純化;...
質粒轉染的大腸桿菌為什麼要挑選單克隆
因為我們挑的是菌落，而一般我們認為一個菌落就是又一個細菌繁殖產生的。所以菌落內的細菌都是同一基因型 也就是說要不然都帶有質粒，要不然都沒有或者是其他質粒 也就是說要挑單克隆。如果挑的不是單克隆，那麼菌落內的細菌的種類就會不同，有的有質粒，有的沒有，有的帶其他質粒。這樣的話，我們做後續的實驗就不好做了...
細菌細胞中的質粒有什麼作用，質粒在細菌裡發揮了什麼作用
質粒是染色體外的遺傳因素，它可以進行自我複製，能代代相傳，並控制著細胞的內一些特性容 質粒還有一種特有的性格，它不像其他的一些細胞結構那樣安心在一個崗位上工作，它經常跳槽。當兩個細胞接觸時，它可以從一個細胞跳到另一個細胞中去，也可以被噬菌體帶著 走親戚 質粒轉移到新的細胞，可以使新的細胞具有質粒所控...
DC B細胞等細胞組成性的表達MHC2類分子 共刺激分子等
dc對抗原的處理 通過mhc 提呈並啟用 cd4 t cells通過 mhc 提呈並啟用 cd8 t cells樹突狀細胞通過細胞表面高水平的mhc 類分子呈遞了豐富的腫瘤抗原肽,使相應的t細胞受體 tcr 被充分佔據 同時,樹突狀細胞提供高水平的協同刺激分子b7 1 cd80 b7 2 cd86 ...