1樓：匿名使用者
1. western blot每孔上樣總量15-50ug大部分蛋白能做出來，跟蛋白質表達量、分子量、抗體效價都密切相關。 2.
組織一般取200mg，勻漿後蛋白常能得到幾百ug，跑十塊膠足夠。
跑western怎麼看蛋白表達是多少
2樓：匿名使用者
蛋白免疫印跡是個半定量的方法，可以粗略的看蛋白表達高了還是低了。精確的得用專酶聯免疫或者
屬熒光等。
組織中總有一些蛋白，表達是非常恆定的，不受一般的化學條件影響，如βactin，gapdh等，這些蛋白就適合做內參，所有我們化學發光顯影的時候，必須把內參蛋白和目的蛋白同時顯出來，通過內參蛋白光密度值，將上樣量歸一化，然後比較目的蛋白的含量，就可以看出目的蛋白隨時間或影響因素變化的規律了。
最近要做western blot，蛋白分子量分別是225kd和95kd 5
3樓：微
單一濃度的膠10或12%的就可以了。
10%比較適合分離30-200 kda的分子，12%適合分離20-150kda的分子，所以看你其他蛋白的分佈。不過這兩種濃度都沒問題的。
4樓：匿名使用者
這種高難度的問題你應該去問你們老師
為什麼western blot結果中，蛋白質檢測分子量會與計算大小不同
5樓：匿名使用者
western blot檢測的結果與理論計算值有差異是非常正常的事情
western blot檢測最重要的意義在於目的蛋白在某細胞或組織中表達情況的定性。而目的蛋白檢測的大小取決於目的蛋白在sds-page的結果，也就是說如果目的蛋白在sds-page上檢測結果是偏大的，那麼在western blot轉膜後也會是偏大的，這和目的蛋白的結構（糖基化修飾），，組成等等都有關係。所以只是一個相對的分子量的結果。
要精確檢測目的蛋白的分子量結果需要做（）檢測
如何做大分子量蛋白的western blot實驗
6樓：溫柔的水
用蛋白marker做對比分子量大校 用內參、對照樣品做蛋白表達量相對變化分析。
用western blot檢測蛋白有兩個蛋白分子量都是60kd怎麼辦
7樓：武漢博歐特生物
最好來是能分開做，分子量自
一樣的兩個蛋白雖然可以洗掉重新砸抗體，但是據我的經驗一般這種都洗的不是很乾淨，而且只能洗掉二抗，若二抗一樣就不能判斷是哪種蛋白，
分子量相差那麼遠的倆個蛋白，在一張膠上，轉膜會很麻煩，會出現小分子量轉過，大分子量還沒轉到膜上的現象
western 內參用的gapdh 和b-actin蛋白的分子量是多少
8樓：mxx米小夕
western 內參用的gapdh分子量為146kd，檢測條帶大
約在36kd，b-actin分子量為42kd。
嚴謹的western blot實驗設計中要內求有良好的參容照體系，這對實驗結果分析是非常有用。要用western blot比較不同條件下或者不同組織中，目的蛋白表達量的相對多少，前提條件是等量的細胞上樣，才有比較的基礎。特別表達量不高時，上樣量的差別就很可能影響結果的分析。
因此需要內參很重要。
9樓：匿名使用者
常用的蛋白內參抄有 beta actin 和 gapdh，它們是有區別的
gapdh分子量為146kd，檢測條帶大約在36kd，beta actin分子量為42kd。一般選擇內參與要檢測的目的蛋白的分子量最好相差5kd以上
另外，細胞總蛋白的western blot的內參蛋白一般用 beta actin ，膜蛋白的western blot一般用gapdh為內參
蛋白濃度多少做western-blot比較合適
10樓：皮的嘛就不談
western-blot是一複種半定量的檢制
測手段。 個人認為bai如果要通過灰度值來計du算蛋白濃度，zhi那就是和內dao參來做對比，因為內參的濃度是已知且單一條帶的蛋白樣品。通過待測樣品盒內參樣品灰度值做對比可以算出待測樣品大概的濃度。
mfn1抗體跑western blot分子量在56kd怎麼回事
11樓：匿名使用者
實際分子量是多少？一般目的蛋白的表觀分子量與實際分子量都會存在差異~因為糖基化修飾等~而且marker的表觀分子量也不一定完全準確~
請問什麼做？請問怎麼做？？？
260 4 65 千米 7 65 455 千米 1430 65 22 小時 答 7小時能行455千米。走完全程需要22小時。請問怎麼做？四分之十三 三又四分之一。8分之19 2又8分之3 三又四分之一 帶分數 和四分之十三 假分數 3個圓 1 4個圓。也就是三又四分之一 13 4 假分數四分之十三 ...
做散文閱讀題有什麼技巧或方法嗎,散文閱讀技巧有哪些？
大致的掃全文.每一個部分的中心點的相似之處便是文章整體的精髓有了精髓就不會跑題.沒有必要死尅一個小細節.學會有的放矢的閱讀.擔不是忽視細節.尤其是作者埋伏下的細節.和中心意思有關的細節.加油 我認為關鍵是要看出作者寫這篇文章的意圖，也就是想要表達的中心思想，然後回答問題圍繞中心思想應該沒有什麼問題的...
請問怎麼做，請問怎麼做淘寶模特？？
這個題的關鍵在於32除3.2的商，是3.2 32，叫做3.2除以32，也可讀作32出3.2，把握了這個，這個題就能做對了 他說75乘來32除3.2的商，所得的積加2.5 其中第一句自話中說75乘 32除3.2的商 後面又說所得的積由此推出先算32除3.2等於10在用75乘10等於750 最後加上2....