1樓：匿名使用者
樓上的回答簡直胡說八道 牛頭不搭馬嘴
紅細胞自身會有自發熒光，因此免疫熒光要避免的話組織塊最好要灌注乾淨，把血管內的紅細胞都灌注乾淨，就能很好地避免紅細胞的非特異染色
2樓：梅儀巫馬書雙
買廠家已經驗證過的特異性好的一抗(有圖有真相)，這點最關鍵。
如何減少免疫熒光檢測中細胞非特異性熒光染色
3樓：匿名使用者
免疫組織化學又稱免疫細胞化學，是指帶顯色劑標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應和組織化學的
免疫熒光結果都是非特異性染色，不知道是什麼原因
4樓：南京金益柏生物科技****
首先你這**看起來很髒，有很多遊離的熒光素，需要加強清洗；再就是**看不到什麼細胞，細胞密度不夠，都比較零散；再就是好的結果跟試劑關係很大，要確保抗體，熒光試劑沒問題，看**，熒光試劑應該沒問題，那就是一抗可能有問題；再就是細胞的處理，是否還有抗原存在。你的問題就是要保證組織細胞處理得當，一抗質量過關，加強清洗，最好還做陰性片（一抗用pbs代替，其他步驟一樣，要是相同的**）
如何減少免疫熒光檢測中細胞非特異性熒光染色
5樓：匿名使用者
是封閉可以非特異性結合蛋白質的位點，也就是減少抗體（一抗和2抗都是蛋白質）的非特異性結合。
6樓：義翹神州加油
買廠家已經驗證過的特異性好的一抗(有圖有真相)，這點最關鍵。
做免疫熒光出現了細胞核外的非特異性染色，是怎麼回事
7樓：治敬雜旁
如果你的**和操作過程都是一樣，而一組沒訊號、另一組卻有訊號，那出現差異的原因就應該是一抗的反應過程（不知你的顯色過程是怎樣的）；而你要是能確定看到的結果不是基因表達的實際情況，即你所說的非特異染色，那就應該是抗體的原因，單就非特異染色而言，可能是你的抗體稀釋度不夠，可以嘗試倍增稀釋比，最好是查詢使用與你用相同抗體的相關文獻的稀釋比，或直接諮詢公司的技術支援；另外一個原因可能是你的抗體不好使，由於你的另一組抗體沒有提供陽性訊號，致使你的體系沒有可靠的對照，建議你選擇一個陽性對照，比如腫瘤中常用的ki67，這樣可以知道你的操作步驟是否存在問題。
我的熒光免疫染色出了什麼問題
免疫熒光的方法有什麼注意環節
8樓：南京金益柏生物科技****
1、冰凍切片製備：建議用新鮮組織，否則組織細胞內部結構破壞，易使抗原彌散。選用乾淨鋒利的刀片、組織一定要冷凍適度等，防止裂片和脫片嚴重。
2、組織切片固定：切好片風乾後立即用冰丙酮等固定液進行固定 5-10 min，尤其要較長時間儲存的白片，一定要及時固定和適當儲存。
3、血清封閉：為防止內源性非特異性蛋白抗原的結合，需要在一抗孵育前先用血清（與二抗**一致）封閉，減弱背景著色。血清封閉的時間是可以調整的，一般 10-30 min。
5、二抗孵育條件：二抗一般室溫或 37℃ 立即觀察，若將標本放在聚乙烯塑料袋中 4℃ 30 min-1h，具體時間需要摸索，而濃度一般有工作液，若是濃縮液還要摸索濃度，切記要避光反應。但在免疫熒光中我們一般先把二抗濃度和孵育時間先定下，然後去摸索一抗濃度和孵育時間。
最後，熒光素標記的二抗隨著儲存時間的延長，可能後有大量的遊離熒光素殘留，需要注意配製時小包裝和並進行適當的離心。
6、復染：目的是形成細胞輪廓，從而更好地對目標蛋白進行定位。一般常用 dapi 復染。
7、封片：為了長期儲存，我們一般用緩衝甘油等封片，此外還有專門的抗熒光萃滅封片液。避免產生氣泡，方法是直接在載玻片組織上滴一滴封片液，然後一手拿住蓋片某一拐角，而另一手拿對面的那個拐角，接近封片液近端的拐角先降低，直至接觸到液體時為止；當發現液體接觸面在不斷彌散時，則可以緩慢降低另一拐角，這樣一般不會產生氣泡。
8、切片清洗：為了防止一抗、二抗等試劑殘留而引起非特異性染色，所以適當地加強清洗（延長時間和增多次數）尤為重要，我一般在一抗孵育前的清洗是 3 min*3 次，而一抗孵育後的清洗均為 5 次*5 min。注意：
單獨沖洗，防止交叉反應造成汙染。溫柔沖洗，防止切片的脫落。我喜歡用浸洗方式；沖洗的時間要足夠，才能徹底洗去結合的物質。
pbs 的 ph 和離子強度的使用和要求。這方面我有慘痛教訓，當時我買的抗體稀釋液偏酸，結果背景一片黃（未見特異性染色），建議 ph 在 7.4-7.
6 濃度是 0.01 m。（中性及弱鹼性條件（ph7-8）有利於免疫複合物的形成，而酸性條件則有利於分解；低離子強度有利於免疫複合物的形成，而高離子強度則有利於分解）
9、拍照：有條件的話最好立即拍照，若不能及時拍照，也要封好片和用指甲油封固，保持避光和溼度。使用熒光顯微鏡注意嚴格按照熒光顯微鏡出廠說明書要求進行操作，不要隨意改變程式；應在暗室中進行檢查；防止紫外線對眼睛的損害，在調整光源時應戴上防護眼鏡；檢查時間每次以1~2 h 為宜，超過 90 min，超高壓汞燈發光強度逐漸下降，熒光減弱；標本受紫外線照射 3~5 min 後，熒光也明顯減弱或褪色；激發光長時間的照射，會發生熒光的衰減和淬滅現象；所以最多不得超過 2~3 h；熒光顯微鏡光源壽命有限，標本應集中檢查，以節省時間，保護光源。
天熱時，應加電扇散熱降溫，新換燈泡應從開始就記錄使用時間。燈熄滅後欲再啟用時，須待燈光充分冷卻後才能點燃。一天中應避免數次點燃光源。
關閉汞燈至少在開啟 15-30 分鐘後；標本染色後立即觀察，因時間久了熒光會逐漸減弱。若將標本放在聚乙烯塑料袋中 4℃ 儲存，可延緩熒光減弱時間，防止封裱劑蒸發；使用的玻片等載體，都必須厚度均勻，無明顯的自發熒光，如果使用油鏡，還必須保證鏡油為無熒光鏡油；電源最好裝穩壓器，否則電壓不穩不僅會降低汞燈的壽命，也會影響鏡檢的效果。
直接免疫熒光和間接免疫熒光染色方法的異同
9樓：糖豆豆
1、接免疫熒光和間接免疫熒光染色方法的不同：
直接免疫熒光的實驗方案通常較短，因為它只需要一個標記步驟。間接免疫熒光使用偶聯二抗檢測一抗會增加額外的操作步驟。
直接免疫熒光方法的實驗方案步驟較少，更簡單。間接免疫熒光方法中必須選擇適當的二抗，增加了複雜度。這種情況在需要使用多個二抗的多色實驗中尤為突出，每個二抗需要靶向不同的物種並偶聯至不同染料。
直接免疫熒光方法中獲得的訊號與間接方法相比可能較弱，因為直接方法中沒有使用二抗進行訊號放大。免疫熒光多個二抗結合一抗可使訊號放大。
2、直接免疫熒光和間接免疫熒光染色方法的相同之處：
免疫熒光 (if) 或細胞成像技術使用抗體將熒光染料（也稱為熒光素或熒光物）標記到特異性目標抗原上，所用熒光染料有諸如異硫氰酸熒光素 (fitc) 等。而通過化學方法偶聯熒光素的抗體被廣泛使用於if實驗中。
根據熒光素與一抗還是二抗偶聯，我們將 if 方法分為兩類：直接 if-使用單個抗體，該抗體直接指向目的靶標，一抗與熒光素直接偶聯；間接 if-使用兩個抗體，一抗未偶聯，熒光素偶聯的二抗指向一抗，並用於檢測。
間接法測抗體基本原理：
染色程式分為兩步，第一步，用未知未標記的抗體（待檢標本）加到已知抗原標本上，在溼盒中37℃保溫30min，使抗原抗體充分結合，然後洗滌，除去未結合的抗體。
第二步，加上熒游標記的抗球蛋白抗體或抗igg、igm抗體。如果第一步發生了抗原抗體反應，標記的抗球蛋白抗體就會和已結合抗原的抗體進一步結合，從而可鑑定未知抗體。
10樓：天蠍神經俠侶
免疫熒光細胞化學方法的原理是根據抗原抗體
組織免疫熒光染色必需用triton嗎
11樓：南京金益柏生物科技****
阻斷液是為bai了削除背景，也就是du滅火內源性zhi的過氧化氫酶，否
dao則將出現內非特異性染色。
通透液起的容作用是抗原修復，也就是說它破壞切片組織細胞的細胞膜和核模，以便與抗體從而可以進入細胞與相應抗原結合。這兩步對免疫組化結果都很重要。
12樓：愛利久sara老師
阻斷液是為了削除背景抄，也就bai是滅火內源性的過氧du化氫酶，否則將出現非特異性zhi染色。
通透液起的作用是抗
dao原修復，也就是說它破壞切片組織細胞的細胞膜和核模，以便與抗體從而可以進入細胞與相應抗原結合。這兩步對免疫組化結果都很重要。
免疫熒光的圖是怎麼回事,免疫熒光圖片如何用photoshop進行merge
這個目的蛋白的抗體濃度是不是有點低了 或者抗原本身表達較低 感覺染色強度很弱 建議提高濃度試試 免疫熒光 如何用photoshop進行merge 免疫熒光 用photoshop進行merge 溶圖 的方法是 1 開啟熒光 版 2 開啟另 權外一張 把熒光 拖進來,ctrl t調整大小 位置 3 根據...
如何測定組織切片免疫熒光的光密度值
實踐證明,bai差生 做du不好計算型化學題的原因除了相zhi 關的知識點掌握的不 dao牢固內外,最致命的缺點是做題習慣不正確容,不知道怎樣把已知的條件進行轉化。如 以物質的質量為中心進行計算,把題目中的已知條件儘可能都轉化成物質的質量,然後再找和未知的聯絡,最後設未知數 列方程。這些最基本的做題...
免疫熒光pe標籤發什麼顏色的光，reelin免疫熒光染色結果看什麼顏色的光
免疫組化是化學顯色 不是發光 免疫熒光是通過抗體上標記的熒光基團發光 reelin免疫熒光染色結果看什麼顏色的光 免疫熒光染色診斷，查的應該是免疫方面的檢查，不知你每次都做的是哪些檢查。熒光二抗標記用hrp ap fitc 生物素法各發什麼顏色熒光？這四個不是一碼事，hrp和ap是酶，二抗上掛了酶，...