1樓：匿名使用者
不是用來測濃度的，可以用來做基因的拷貝數。測濃度最經典的還是紫外分光光度計，當然會有偏差，不過總體來說還是可以的。也可以用酶標儀。
2樓：北京索萊寶科技****
實時熒光定量pcr不是用來測濃度的，可以用來做基因的拷貝數。但是如果你的產物單一，有相應的標準品，也是可以測濃度的，濃度的準確性和你的標準曲線相關。
實時熒光定量pcr：
實時熒光定量pcr( realtime fluorescence quantitative pcr，rtfq pcr) 是1996 年由美國applied biosystems 公司推出的一種新定量試驗技術，它是通過熒光染料或熒游標記的特異性的探針，對pcr產物進行標記跟蹤，實時**監控反應過程，結合相應的軟體可以對產物進行分析，計算待測樣品模板的初始濃度。
檢測指標是：各樣品的目的基因和管家基因分別進行realtime pcr反應。pcr產物與 dna ladder在2%瓊脂糖凝膠電泳，goldview染色，檢測pcr產物是否為單一特異性擴增條帶。
精確測定dna濃度的方法：
dna純度和濃度的檢測：分光光度(紫外吸收)法
1.預熱紫外分光光度計10-20分鐘。
2.取所需的比色杯（4ml），其中一隻裝入3 mlh2o溶液，作為空白液，用來校正分光光度計零點及調整透光度至100。
3. dna純度及濃度的測定：
取3微升的dna樣品加入比色杯，加dh2o至3000微升，混勻。
將比色杯置入分光光度計中，調入射光波長，分別用空白溶液調整零點（t為100，od為0），測待測樣品在260nm、280nm、230nm的od值。
計算濃度：dna濃度（ug/ml）=a260×50ug/ml×稀釋倍數。
對於雙鏈dna od260=50 ug/ml
對於單鏈rna od260=40 ug/ml
4. 純的dna溶液其od260/od280應為，od260/od230應大於。
od260/od280大於時，說明有rna汙染，小於時表明有蛋白質或酚汙染。
實時熒光定量pcr的結果該怎樣分析？
3樓：群英鬥將
1、如果有標準曲線，按照標準曲線計算；
2、一般都是相對量，則用delta delta ct方法來計算；
3、引物或探針降解：可通過page電泳檢測其完整性；
4、模板量不足：對未知濃度的樣品應從系列稀釋樣本的最高濃度做起；
5、看ct值是分析熒光定量pcr最直觀的一個資料，ct值一般在35左右就失去參考價值了，平時我們實驗室用biodai-pcr熒光定量法測得的擴增曲線的起跳值基本在30左右。
4樓：南京金益柏生物科技****
用2-△△ct法算的話，應如何算？ 假設檢測a基因，ct分別為（這裡記住ct越大，表明相對含量越低） 普通組/test1：28 實驗組1/test2：
29 實驗組2/test3：30 這時候要設對照了，假設test1為對照組（普通組），當然是以普通組為對照 那麼，相對含量為。
5樓：匿名使用者
看ct值、起始拷貝數、標準偏差等。
如果是sybr做的話，再看下溶解曲線。
實時熒光定量pcr注意事項
6樓：瀕危物種
1.按照正確的開關機順序操作，有助於延長儀器的使用壽命，減少儀器出故障的頻率。開機順序：
先開電腦，待電腦完全啟動後再開啟定量pcr儀主機，等主機面板上的綠燈亮後即可開啟定量pcr的收集軟體，進行實驗。關機順序：確認實驗已經結束後，首先關閉訊號收集軟體，然後關掉定量pcr儀主機的電源，最後關閉電腦。
2.應該定期備份您的實驗資料，備份頻率推薦每週一次，用光碟燒錄。同時您也應該備份定量pcr儀的各種純熒光光譜校正檔案、背景檔案和安裝驗證實驗資料，這些檔案所在的目錄是c：
電源：推薦配備合適的ups或穩壓器。
通風：儀器的通風應該沒有阻擋。
溫度：推薦實驗室配備空調，溫度應該控制在10-30°c之間。
空間：易於操作，安全。
4.怎樣判斷定量pcr儀的樣本加熱塊是否被汙染？怎樣清除汙染。
一個辦法是執行背景校正反應板，當一個或多個反應孔連續顯示出不正常的高訊號，則表明該孔可能被熒光汙染物。另外一種辦法是在不放任何物品到樣本塊上的前提下，執行roi的校正，當某個孔的訊號明顯高出其他孔時，則表明該孔被汙染。
清除樣本加熱塊汙染的步驟如下：用移液器吸取少量乙醇並滴入每個汙染的反應孔中。吹打數次。
將廢液吸入廢液杯中。重複以上步驟：乙醇三次，去離子水三次。
確認反應孔中的殘留液體蒸發完。
實時熒光定量PCR的個體重複問題
最好是不要，這樣會減小重複之間的誤差。特別是需定量的樣品，混樣對定量結果的準確性是有影響的 實時熒光定量pcr的重複性好是什麼意思 3個實驗重複的ct值的標準差在0.167以內 abi的標準 我們一般在0.5以內就可以了 實時熒光定量pcr的結果該怎樣分析？1 如果有標準曲線，按照標準曲線計算 2 ...
實時熒光定量pcr加入的cdna的a260 280很低，有影
沒有bai影響，實時熒光定du量pcr quantitative real time pcr 是一種在zhidna擴增反應中，以熒光化dao 學物質測每次聚合版酶鏈式反應 pcr 迴圈 實時熒光定量pcr，cdna的加入量會影響結果的準確度嗎 兩者沒有必然的聯絡，準確度一般是儀器決定的，不同的儀器準...
熒光定量pcr的原理,熒光定量PCR的原理
pcr擴增時在加入一對引復物的同時制加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發射的熒光訊號被淬滅基團吸收 剛開始時,探針結合在dna任意一條單鏈上 pcr擴增時,tap酶的5 端 3 端外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團...