1樓：南京金益柏生物科技****
原理不同：熒光定量pcr實時監測與dna結合的熒光染料激發的熒光；普通pcr通過檢測
回插入dna中核算染答
料的量來測定pcr最終產物量,一般是紫外光.
反應要求：熒光定量對擴增片段有較高的要求,一般為100-300bp；普通定量可以擴增長點的片段.如果不需要檢測產物分子量大小,熒光定量可以不進行電泳就對產物進行定量分析,普通pcr必須電泳.
結果：熒光定量可以實現精確定量,普通pcr則不行.熒光定量體現可以看到整個擴增過程,可以看到擴增效率,溶解溫度,直接得到的標準曲線等,這些是普通pcr無法實現的.
如果還不清楚建議去丁香園等**逛逛,希望可以幫到你
rt-pcr與熒光定量 pcr有什麼區別
2樓：朵向日葵熊
實時熒光定量pcr技術，是指在pcr反應體系中加入熒光基團，利用熒光訊號積累實時監測整個pcr程序，最後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
pcr(聚合酶鏈式反應）是利用dna在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫（經常是60°c左右）時引物與單鏈按鹼基互補配對的原則結合，再調溫度至dna聚合酶最適反應溫度（72°c左右），dna聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。
恆溫pcr和實時熒光定量pcr的不同，是不同在實時熒光定量pcr的系統中加入了熒光染料（sybr green 或taqman 探針等等）。以sybr green為例，這種染料可以結合在雙鏈的dna上，當pcr不斷進行時，每一次退火生成的雙鏈dna也在增加，熒光染料結合也越多，熒光也越強。在機器中有一個探測熒光的探頭，可以定量檢測熒光的強度，轉換成數值。
這樣就可以實時記錄反映體系中dna的反應情況。
熒光pcr更有優勢，因為熒光pcr靈敏度高於恆溫pcr，同樣**也高一些。
什麼是實時熒光定量pcr？有什麼作用？請詳細說明。
3樓：月光_傾城
好多生物工作做廣告做培訓噢。你怎麼不去看一下。
實時定量pcr的結果是怎樣分析的
4樓：小乾乾
1、如果有標準曲線，按照標準曲線計算。
2、一般都是相對量，則用delta delta ct方法來計算。
3、舉例如下：對照組基因a的ct值為20， 內參（比如βactin)ct值15。實驗組基因a ct值18，內參ct值14。
4、首先算加樣量：delta ct=15-14=1。2的1次方是2。
也就是說實驗組的加樣量是對照組的2倍。基因a: delta ct=20-18=2。
2的2次方是4。也就是說基因a的量在實驗組是對照組的4倍。但是由於加樣量是2倍，所以4處以2=2，最後的相對量是2倍。
5、幾點注意：必須確定擴增的特異性，只有相同目標的ct值才能相減（擴增效率有可能不同），2的某次方只是理論值，實際擴增效率低於2，最好不用syber green。
5樓：豆村長de草
實時熒光定量pcr技術是在pcr反應體系中加入熒光基團，利用熒光訊號積累實時監測整個pcr程序，最後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
基線在pcr擴增反應的最初數個迴圈裡，熒光訊號變化不大，接近一條直線，這樣的直線即基線。光域值threshold的設定，一般將pcr反應前15個迴圈的熒光訊號作為熒光本底訊號，熒光域值是pcr3-15個迴圈熒光訊號標準差的10倍，熒光域值設定在pcr擴增的指數期。
融解曲線是用來驗證擴增產物特異性的，如果產物是單一條帶，融解曲線就會出現一尖峰；如果有引物二聚體或其它非特異性擴增，就會出現至少兩個尖峰。
擴充套件資料：
時熒光定量pcr儀real-time qpcr 常見問題分析：
1、無ct值出現
1）檢測熒光訊號的步驟有誤：一般sg法採用72℃延伸時採集，taqman法。則一般在退火結束時或延伸結束採集訊號；
2）引物或探針降解：可通過page電泳檢測其完整性；
3）模板量不足：對未知濃度的樣品應從系列稀釋樣本的最高濃度做起；
4）模板降解：避免樣品製備中雜質的引入及反覆凍融的情況。
2、ct 值出現過晚（ct>38）
1）擴增效率低:反應條件不夠優化，設計更好的引物或探針、改用三步法 進行反應、適當降低退火溫度、增加鎂離子濃度等；
2）pcr各種反應成分的降解或加樣量不足，
3）pcr產物太長：一般採用80-150bp的產物長度。
3、標準曲線線性關係不佳
1）加樣存在誤差：使得標準品不呈梯度；
2）標準品出現降解：應避免標準品反覆凍融，或重新制備並稀釋標準品；
3）引物或探針不佳：重新設計更好的引物和探針；
4）模板中存在抑制物，或模板濃度過高。
6樓：匿名使用者
實時定量pcr的結果是可以和所有核酸結合，沒有特異性。
要保證特異性的話，最好用其他的方法。擴增體系中加入模板dna的體積，比如同時10微升的體系，對照組加1微升dna，實驗組加2微升dna，則實驗組的加樣量是對照組的2倍。
看ct值是分析熒光定量pcr最直觀的一個資料，ct值一般在35左右就失去參考價值了，平時我們實驗室用biodai-pcr熒光定量法測得的擴增曲線的起跳值基本在30左右。
擴充套件資料：
real-time qpcr 常見問題分析：
一、無ct值出現
1、檢測熒光訊號的步驟有誤：一般sg法採用72℃延伸時採集taqman法。
則一般在退火結束時或延伸結束採集訊號。
2、引物或探針降解：可通過page電泳檢測其完整性。
3、模板量不足：對未知濃度的樣品應從系列稀釋樣本的最高濃度做起。
4、模板降解：避免樣品製備中雜質的引入及反覆凍融的情況。
二、ct 值出現過晚（ct>38）
1、擴增效率低:反應條件不夠優化，設計更好的引物或探針、改用三步法 進行反應、適當降低退火溫度、增加鎂離子濃度等。
2、pcr各種反應成分的降解或加樣量不足。
3、pcr產物太長：一般採用80-150bp的產物長度。
三、標準曲線線性關係不佳
1、加樣存在誤差：使得標準品不呈梯度。
2、標準品出現降解：應避免標準品反覆凍融，或重新制備並稀釋標準品。
3、引物或探針不佳：重新設計更好的引物和探針。
4、模板中存在抑制物，或模板濃度過高。
四、負對照有訊號、溶解曲線不止一個主峰
1、引物設計不夠優化：應避免引物二聚體和髮夾結構的出現。
2、引物濃度不佳：適當降低引物的濃度，並注意上下游引物的濃度配比。
3、鎂離子濃度過高：適當降低鎂離子濃度，或選擇更合適的mix 試劑盒。
4、模板有基因組的汙染：rna提取過程中避免基因組dna 的引入，或通過引物設計避免非特異擴增。
五、擴增效率低
1、反應試劑中部分成分特別是熒光染料降解。
2、反應條件不夠優化：可適當降低退火溫度或改為三步擴增法。
3、反應體系中有pcr反應抑制物：一般是加入模板時所引入，應先把模板適度稀釋，再加入反應體系中，減少抑制物的影響。
7樓：寵愛認
常見分析角度：
1.無ct值出現
（1）檢測熒光訊號的步驟有誤：一般sg法採用72℃延伸時採集，taqman法則一般在退火結束時或延伸結束採集訊號；
（2）引物或探針降解：可通過page電泳檢測其完整性；
（3）模板量不足：對未知濃度的樣品應從系列稀釋樣本的最高濃度做起；
（4）模板降解：避免樣品製備中雜質的引入及反覆凍融的情況。
2.ct 值出現過晚（ct>38）
（1）擴增效率低:反應條件不夠優化，設計更好的引物或探針、改用三步法 進行反應、適當降低退火溫度、增加鎂離子濃度等；
（2）pcr各種反應成分的降解或加樣量不足，
（3）pcr產物太長：一般採用80-150bp的產物長度。
3.標準曲線線性關係不佳
（1）加樣存在誤差：使得標準品不呈梯度；
（2）標準品出現降解：應避免標準品反覆凍融，或重新制備並稀釋標準品；
（3）引物或探針不佳：重新設計更好的引物和探針；
（4）模板中存在抑制物，或模板濃度過高。
4.負對照有訊號、溶解曲線不止一個主峰
（1）引物設計不夠優化：應避免引物二聚體和髮夾結構的出現；
（2）引物濃度不佳：適當降低引物的濃度，並注意上下游引物的濃度配比；
（3）鎂離子濃度過高：適當降低鎂離子濃度，或選擇更合適的mix 試劑盒；
（4）模板有基因組的汙染：rna提取過程中避免基因組dna 的引入，或通過引物設計避免非特異擴增。
5.擴增效率低
（1）反應試劑中部分成分特別是熒光染料降解；
（2）反應條件不夠優化：可適當降低退火溫度或改為三步擴增法；
（3）反應體系中有pcr反應抑制物：一般是加入模板時所引入，應先把模板適度稀釋，再加入反應體系中，減少抑制物的影響。
實時熒光pcr和高通量pcr是同一意思麼？它們分別是什麼意思有什麼作用？最好具體點 謝了
8樓：匿名使用者
realtime pcr 實時熒光定量pcr，常見有taqman探針法、sybr green i 染料法，對樣本中某一基因進行相對或絕對專定量；
高通量pcr是二代測屬序技術，邊合成邊測序，empcr等，通量非常高，是為測序而設計的pcr。
9樓：匿名使用者
不是一個意思。前者是測定某種dna的含量，後者是一次可以擴增很多種dna。
real-time rt-pcr是什麼意思
10樓：當家的
實時熒光定量rt-pcr
雙語對照
詞典結果：
網路釋義
1. 熒光定量rt-pcr
2. 實時定量rt-pcr
3. 熒光rt-pcr
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