1樓:匿名使用者
pcr技術的基本原理 類似於dna的天然複製過程,其特異性依賴於與靶序列兩端版互補的寡核苷酸引物。pcr由變性權--退火--延伸三個基本反應步驟構成:①模板dna的變性:
模板dna經加熱至93℃左右一定時間後,使模板dna雙鏈或經pcr擴增形成的雙鏈dna解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應作準備;②模板dna與引物的退火(復性):模板dna經加熱變性成單鏈後,溫度降至55℃左右,引物與模板dna單鏈的互補序列配對結合;③引物的延伸:dna模板--引物結合物在taqdna聚合酶的作用下,以dntp為反應原料,靶序列為模板,按鹼基配對與半保留複製原理,合成一條新的與模板dna 鏈互補的半保留複製鏈重複迴圈變性--退火--延伸三過程,就可獲得更多的「半保留複製鏈」,而且這種新鏈又可成為下次迴圈的模板。
每完成一個迴圈需2~4分鐘, 2~3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍
2樓:匿名使用者
①模板dna的變性:抄模板dna經加熱至93℃左
襲右一定時間後,使模板dna雙鏈或經pcr擴增形成的雙鏈dna解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應作準備;②復性:模板dna經加熱變性成單鏈後,溫度降至55℃左右,引物與模板dna單鏈的互補序列配對結合;③引物的延伸:dna模板--引物結合物在72℃、dna聚合酶的作用下,以靶序列為模板,按鹼基互補配對與半保留複製原理,合成一條新的與模板dna鏈互補的半保留dna。
簡而言之的話就是鹼基互補配對
3樓:秒懂**
pcr擴增:是體外酶促合成特異dn**段的一種方法
獲取目的基因是可利用pcr技術闊增利用什麼原理
4樓:勤奮的珠寶女
pcr技術的基本原理
⑴pcr技術的基本原理:該技術是在模板dna、引物和四種脫氧核糖核苷酸存在下,依賴於dna聚合酶的酶促合成反應。dna聚合酶以單鏈dna為模板,藉助一小段雙鏈dna來啟動合成,通過一個或兩個人工合成的寡核苷酸引物與單鏈dna模板中的一段互補序列結合,形成部分雙鏈。
在適宜的溫度和環境下,dna聚合酶將脫氧單核苷酸加到引物3´-oh末端,並以此為起始點,沿模板5´→3´方向延伸,合成一條新的dna互補鏈。
《pcr技術》
pcr反應的基本成分包括:模板dna(待擴增dna)、引物、4種脫氧核苷酸(dntps)、dna聚合酶和適宜的緩衝液。類似於dna的天然複製過程,其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。
pcr由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成:①模板dna的高溫變性:模板dna經加熱至93℃左右一定時間後,使模板dna雙鏈或經pcr擴增形成的雙鏈dna解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應作準備;②模板dna與引物的低溫退火(復性):
模板dna經加熱變性成單鏈後,溫度降至55℃左右,引物與模板dna單鏈的互補序列配對結合;③引物的適溫延伸:dna模板--引物結合物在taqdna聚合酶的作用下,以dntp為反應原料,靶序列為模板,按鹼基配對與半保留複製原理,合成一條新的與模板dna鏈互補的半保留複製鏈重複迴圈變性-退火-延伸三過程,就可獲得更多的「半保留複製鏈」,而且這種新鏈又可成為下次迴圈的模板。每完成一個迴圈需2~4分鐘,2~3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。
⑵pcr的反應動力學:pcr的三個反應步驟反覆進行,使dna擴增量呈指數上升。反應最終的dna擴增量可用y=(1+x)n計算。
y代表dn**段擴增後的拷貝數,x表示平(y)均每次的擴增效率,n代表迴圈次數。平均擴增效率的理論值為100%,但在實際反應中平均效率達不到理論值。反應初期,靶序列dn**段的增加呈指數形式,隨著pcr產物的逐漸積累,被擴增的dn**段不再呈指數增加,而進入線性增長期或靜止期,即出現「停滯效應」,這種效應稱平臺期數、pcr擴增效率及dna聚合酶pcr的種類和活性及非特異性產物的竟爭等因素。
大多數情況下,平臺期的到來是不可避免的。
⑶pcr擴增產物:可分為長產物片段和短產物片段兩部分。短產物片段的長度嚴格地限定在兩個引物鏈5'端之間,是需要擴增的特定片段。
短產物片段和長產物片段是由於引物所結合的模板不一樣而形成的,以一個原始模板為例,在第一個反應週期中,以兩條互補的dna為模板,引物是從3'端開始延伸,其5'端是固定的,3'端則沒有固定的止點,長短不一,這就是「長產物片段」。進入第二週期後,引物除與原始模板結合外,還要同新合成的鏈(即「長產物片段」)結合。引物在與新鏈結合時,由於新鏈模板的5'端序列是固定的,這就等於這次延伸的片段3'端被固定了止點,保證了新片段的起點和止點都限定於引物擴增序列以內、形成長短一致的「短產物片段」。
不難看出「短產物片段」是按指數倍數增加,而「長產物片段」則以算術倍數增加,幾乎可以忽略不計,這使得pcr的反應產物不需要再純化,就能保證足夠純dn**段供分析與檢測用。
5樓:少儼充開誠
直接從生物組織中提取的dna的量一般都是很少的,所以需要pcr進行擴增,使其達到一定的濃度,才方便進行下一步的操作。
怎樣理解pcr技術是獲取目的基因的途徑?
6樓:葵久
題目獲bai取目的基因的方du法有多種,下列不屬zhi
於目的基因獲取
方dao法的是() a.從基因組文回庫中獲取b.從答cdna文庫中獲取c.
從含目的基因生物細胞中獲取d.利用pcr技術獲取答案c為什麼不能直接從含有目的基因的生物細胞中獲取?利用pcr技術不是擴增目的基因嗎?
怎樣理解pcr技術是獲取目的基因的方法?2討論姜萬錄「獲取目的基因」是實施基因工程的第一步。目的基因可以從自然界中已有的物種中分離出來,也可以用人工的方法合成。
為什麼不能直接從含有目的基因的生物細胞中獲取?因為生物細胞中所含的目的基因很少,要從浩瀚的「基因海洋」中獲得特定的目的基因,猶如大海撈針,是十分不易的。因此需要構建基因文庫或利用pcr技術擴增。
生物疑問利用PCR技術擴增含目的基因的DNA分子來形成目的基因,需要3步 為什麼?過程是什麼
pcr技術copy過程簡介 1.將目的基因與引物,以及耐高溫的dna聚合酶加入pcr擴增儀中。加熱到90 95 讓目的基因解旋。2.降溫至55 60 讓引物與 中的dna單鏈結合。3.加熱至70 75 讓耐高溫的dna聚合酶工作,大量擴增目的基因。利用pcr技術擴增目的基因,為什麼是三次 pcr擴增...
PCR擴增技術的引物是什麼?怎麼得到的?
在細胞內,dna複製的引物是rna,因為存在引物酶催化其合成,新鏈合成後又有dna聚合酶i對其進行5 端外切和填補,最後由dna連線酶縫合相鄰岡崎片段。因為是已知序列的核甘酸序列,所以可以人工合成得到。利用pcr技術擴增目的基因,引物是什麼?引物是什麼 引物是人工設計合成的一對 兩個 小片段dna,...
RTPCR擴增目的基因cDNA需要注意的事項有哪些
rt pcr 是將 rna 的反轉錄 rt 和 cdna 的聚合酶鏈式擴增 pcr 相結 合的技術。作用從 rna 合成 cdna,再以 cdna 為模板,擴增合成目的片段。rt pcr 技術靈敏而且用途廣泛,可用於檢測細胞中基 因表達水平,細胞中 rna 病毒的含量和直接克隆 特定基因的 cdna...