1樓:朝顏_林西
rt-pcr 是將 rna 的反轉錄(rt)和 cdna 的聚合酶鏈式擴增(pcr)相結 合的技術。
作用從 rna 合成 cdna,再以 cdna 為模板, 擴增合成目的片段。
rt-pcr 技術靈敏而且用途廣泛,可用於檢測細胞中基 因表達水平,細胞中 rna 病毒的含量和直接克隆 特定基因的 cdna 序列。
作為模板的 rna 可以是總 rna、mrna 或體外轉錄的 rna 產物。無論使用何 種 rna,關鍵是確保 rna 中無 rna 酶和基因組 dna 的汙染。
rna 的反轉錄過程遇到的問題
1. 在實驗過程中要防止 rna 的降解,保持 rna 的完整性。在總 rna 的提取 過程中,注意避免 mrna 的斷裂。
2. 為了防止非特異性擴增,必須設陰性對 照。
3. 內參的設定:主要為了用於靶 rna 的定量。常用的內參有 g**d(甘 油醛-3-磷酸脫氫酶)、β-actin(β-肌動蛋白)等。
其目的在於避免 rna 定量 誤差、 加樣誤差以及各 pcr 反應體系中擴增效率不均一各孔間的溫度差等所造成 的誤差。
4. pcr 不能進入平臺期,出現平臺效應與所擴增的目的基因的長 度、序列、二級結構以及目標 dna 起始的數量有關。故對於每一個目標序列出現 平臺效應的迴圈數, 均應通過單獨實驗來確定。
5. 防止 dna 的汙染:(1) 採用 dna 酶處理 rna 樣品。
pcr擴增技術獲取目的基因的原理是
pcr技術的基本原理 類似於dna的天然複製過程，其特異性依賴於與靶序列兩端版互補的寡核苷酸引物。pcr由變性權 退火 延伸三個基本反應步驟構成 模板dna的變性 模板dna經加熱至93 左右一定時間後，使模板dna雙鏈或經pcr擴增形成的雙鏈dna解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作...
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基因工程中，載體與載體連線物，目的基因與目的基因連線物，目的基因與載體連線物分別是指什麼，滿意的話
經過同一種限制性內切酶切割後會產生相同的粘性末端，所以目的 基因可內與目的基因連線，載體可與載容體連線，也有目的基因和載體連線。用限制性內切酶切了以後，讓片段自己連線，就會出現三種連線方式，然後我們選擇出來需要的重組片段 基因工程構建基因表達載體的問題 我估計這個構建是利用你提到的酶切位點在你所說的...