為什麼PCR要經歷三十多次迴圈?

2024-12-25 15:20:07 字數 2420 閱讀 9184

1樓:萬能小知道

在復性過程中引物與dna模板鏈的結合是由鹼基互補配對原理完成的。

pcr迴圈數通常約為 30 個,迴圈次數過多,雖然可以在一定程度上增加產品的數量,但由於反應時間長,一些非特異性產品的擴增也會相應增加,並且隨著酶擴增能力的降低,合成靶片段的能力也會降低,這也可能引起其他非特異性擴增。

dntp也將被消耗,如果乙個dntp消耗很多,後續的擴增將不可避免地導致不匹配。因此,如果產品足夠用於後續分析,迴圈時間將不會過度延長。在選定的變性溫度下,dna分子越長,完全分離兩條鏈所需的時間就越長。

如果變性溫度太低或時間太短。

通常只有模板dna中富含at的區域被變性,在pcr的第乙個週期中,有時變性時間通常設計為 5 min,以增加大分子模板dna也稱為預變性完全變性的可能性。當模板dna的g + c含量超過 55% 時,需要更高的變性溫度,源自古細菌的dna聚合酶比taqdna聚合酶對高溫的抵抗力更高。

因此,它更適合擴增富含gc的dna模板,復性過程中使用的溫度比如:i.e.退火 是至關重要的,如果復性溫度過高,寡核苷酸引物不能用模板很好地復性,擴增效率將非常低。從這個角度來看,絕大多數擴增產品應該是特異性擴增產品,而非特異性擴增產品太低而無法檢測。

關於以上的問題今天就講解到這裡,如果各位朋友們有其他不同的想法跟看法,可以在下面的評論區分享你們個人看法,喜歡我的話可以關注一下,最後祝你們事事順心。

2樓:彩虹巧克力糖豆

因為30次的迴圈酶的活性是最好的落實,迴圈太多次可能會導致累計基因突變得太嚴重。

3樓:涅槃重生

因為pcr擴增的原理是利用引物結合模板以鹼基互補配對的原則進行擴增,而引物的結合位點是隨機的。因此一般來說在經歷三十多個迴圈後,目標產物的量會達到最佳,非特異性產物量較少。

4樓:優惠列印影印

一般情況下,迴圈次數太少不夠用,迴圈30次產生的基因片段就夠用 ,迴圈次數太多引物和底物都消耗掉了,每次迴圈有可能突變,這樣迴圈數太多的話突變累計基因的突變就太嚴重了。所以30次左右最妥當。

pcr迴圈次數是否越多越好?為什麼

5樓:惠企百科

當然不是越多越好。

迴圈次數過多,並不褲鏈會計產物也隨之過度增加。因為再次迴圈都有高溫到低的溫度變化,聚合酶的活性有限,而且一般體胡段孫系中引物。

和原料的量也不會是無限**的。

另外迴圈次數過多,產物間可能會形成較為複雜的結構,影響其作為模板的效率,因此迴圈次數不是越多越燃告好,一般pcr反應的迴圈不超過35次。

pcr迴圈次數是否越多越好?為什麼

6樓:網友

當然不是越多越好。

迴圈次數過多,並不會計產物也隨之過度增加。因為再次迴圈都有高溫到低的溫度變化,聚合酶的活性有限,而且一般體系中引物和原料的量也不會是無限**的。

另外迴圈次數過多,產物間可能會形成較為複雜的結構,影響其作為模板的效率,因此迴圈次數不是越多越好,一般pcr反應的迴圈不超過35次。

7樓:網友

不是的,隨著反應的進行,酶會逐漸失活、dntp等原料會逐漸消耗掉。因此在一定範圍內,隨著反應迴圈數的增加,產物會增多;但超過了就不好了。

一般設定30-35個迴圈就很夠了。

8樓:網友

pcr迴圈次數通常就是30左右。迴圈數太多了,雖然可以一定程度的提高產物量,但是由於反應時間過長,有一些非特異產物的擴增也會相應增加,而且隨著酶的擴增能力下降,合成目標片段的能力也會隨之下降,也可能引起其他的非特異擴增。dntp也會消耗,如果有某一種dntp消耗比較大,後續擴增就難免會引起錯配。

所以如果產物已經足夠用於後續分析,一般都不太會過度延長迴圈次數的。

pcr為什麼第三輪才等長

9樓:

摘要。pcr的原理可以在網上找個動畫**看看,很好理解。把dna看成兩條直線,第一次pcr得到兩條射線,第二次pcr得到兩條射線和兩條線段,第三次pcr得到兩條射線和六條線段。

線段的長度是一樣的(即兩引物間的距離),所以第三次開始得到跟第二次一樣長度的dna分子。

pcr的原理可以在網上找個動畫**看看,很好理解。把dna看成兩條直線,第一次pcr得到兩條射線,第二次pcr得到兩條射線和兩條線段,第三次pcr得到兩條射線和六條線段。線枝襲段的長度是一樣的(即兩引物間的距離),所以腔搭歷第三次開始得到跟第二次一樣長度的dna分子。

伍搜。pcr的原理可以在網上找個動畫**看看,很好理解。把dna看成兩條直線,第一次pcr得到兩條射線,第二次pcr得到兩條射線和兩條線段,第三次pcr得到兩條射線和六條線段。線枝襲段的長度是一樣的(即兩引物間的距離),所以腔搭歷第三次開始得到跟第二次一樣長度的dna分子。

伍搜。有。有動畫。

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